稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立-畜牧兽医学报.PDFVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１３４４４ ５３５５４２ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维 细胞系的建立 ， ， １３ １ １ １ １ １ １ １２ 黄妙容 ，张献伟 ，刘德武 ，邹 娴 ，帅 亮 ，袁玉娟 ，朱财林 ，吴珍芳 　 　 （ 华南农业大学动物科学学院，广州 ； 广东省温氏集团研究院，新兴 ； １． ５１０６４２ ２． ５２７４００ ３．肇庆大华农生物药品有限公司，广东省兽用生物制品技术研究与应用企业重点实验室，肇庆 ５２６２３８） 摘 要：旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体，筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维 　 细胞系，为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用 和 方法，分别扩增获得筛 ＳＯＥＰＣＲ ＰＣＲ 选标记基因ＮＥＯＴ２ＡＥＧＦＰ序列和纤维素酶相关基因的融合序列 ＳＰＥＧＸＦ２ＡＢＧＬ１，构建腮腺特异性表达载 体 ，经 、酶切、测序鉴定正确后，通过脂质体转染猪胎儿成纤 ｐＰＳＰＳＰＥＧＸＦ２ＡＢＧＬ１ＣＭＶＮＥＯＴ２ＡＥＧＦＰ ＰＣＲ 维细胞，利用 抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选，并利用 和 进行检测。结果表明，成功构 Ｇ４１８ ＰＣＲ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体，并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系。该 结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础。 关键词：双筛选标记；纤维素酶； ；猪胎儿成纤维细胞 ２Ａ 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８２８Ｓ８１４．１ Ａ ０３６６６９６４２０１３０４０５３５０８ 　　　　 　　　　 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犜狉犪狀狊犲狀犻犮犘狅狉犮犻狀犲犉犲狋犪犾犉犻犫狉狅犫犾犪狊狋犆犲犾犾犔犻狀犲犛狋犪犫犾犜狉犪狀狊犳犲犮狋犲犱 犵 狔 狑犻狋犺犉犻犫狉狅犾狋犻犮犈狀狕犿犲狊犛狀狋犺犲狊犻狊犌犲狀犲狊 狔 狔 狔 ， １ ３ １ １ １ ， ， ， ， ＨＵＡＮＧＭｉａｏｒｏｎｇ ＺＨＡＮＧＸｉａｎｗｅｉ ＬＩＵＤｅｗｕ ＺＯＵＸｉａｎ ，