细胞培养_杨达云.pdf

细胞培养、冻存和复苏 的基本技术 转化医学研究院 杨达云 2015-9-16 主要内容 一、细胞培养的基本概念 二、细胞培养的基本条件 三、细胞培养用液的配制 四、细胞培养的基本方法 五、培养的细胞活力测定 六、细胞的冻存和复苏 七、细胞培养的污染和检测 2 一、细胞培养的基本概念 细胞培养(cell culture) ： 是指从体内取出组织，分离细胞；或使用细胞系，在体外模拟体内生理环境，在无 菌、适当温度和一定的营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能特性。 原代培养 传代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件 原代培养的细胞或细胞系， 在生长、繁殖一定时间后， 下生长的细胞，在传代之前称为原 由于空间不足或细胞密度过 代培养。 大，导致营养枯竭，会影响 细胞的生长，因此需要进行 优点 扩大培养，即传代或称为传 组织细胞刚脱离机体，生物性状尚未 代培养。 发生较大变化，在一定程度上能够反 映体内的状态。 3 Useful Numbers for Cell Culture There are various sizes of dishes and flasks used for cell culture. Some useful numbers such as surface area and volumes of dissociation solutions are given below for various size culture vessels. Cells at Versene Trypsin (ml Growth Surface 2 Seeding Confluency (ml of of 0.05% Medium Area (mm ) Density 1 0.05% tryspin, (ml) EDTA) EDTA) Dishes 35 mm 962 0.3 x 106 1.2 x 106 1 1 2 60 mm 2,827 0.8 x 106 3.2 x 106 3 2 3 100 mm 7,854 2.