波谱分析课件第二章色谱法的原理.ppt

第二章 色谱法的原理 第一节：色谱分析的基本原理 第二节：色谱法中常用的术语和参数 第三节：色谱的速率理论 第一节：色谱分析的基本原理 1．色谱法分离原理 色谱法之所以可以分离混合物，关键是它有一个高效的色谱柱（固定相）。物质在柱内的分离过程，是物质在固定相和流动相之间发生吸附、脱附（或溶解、解析）的过程。被分离物按其溶解和解析的能力（或吸附和脱附的能力）的大小，以一定的比例分配在固定相和流动相之间。溶解（吸附）能力大的组分分配给固定相多一些，分配给流动相少一些。这可用分配系数K表示。 分配系数K 分配系数K 如前所述，分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次地吸附一脱附过程。这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数见它是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即 当K=1时，组分在固定相和流动相中浓度相等； 当K1时，组分在固定相中的浓度大于在流动相中的浓度； 当K1时，组分在固定相中的浓度小于在流动相中的浓度。 不同物质的分配系数相同时，它们不能分离。 色谱柱中不同组分能够分离的先决条件是其分配系数不等。 分配系数K小的组分：在气相中停留时间短，较早流出色谱柱。 分配系数大的组分：在气相中的浓度较小，移动速度慢，在柱中停留时间长，较迟流出色谱柱。 两组分分配系数相差越大，两峰分离的就越好。 最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。 该理论假定： （i）在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间的分配瞬间完成。这一小段柱长称为理论塔板高度H。 （ii）以气相色谱为例，载气进入色谱柱不是连续进行的，而是脉冲式，每次进气为一个塔板体积（ΔVm）。 （iii）所有组分开始时全部进入0号塔板，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。 （iv）分配系数在所有塔板上是常数，与组分在某一塔板上的量无关。 为简单起见，设色谱往由5块塔板（n＝5，n为柱子的塔板数）组成，并以r表示塔板编号，r=1，2…，n－l；某组分的分配比k=1. 根据上述假定，在色谱分离过程中，该组分的分布可计算如下： 开始时，若有单位质量，即m=1（例1mg或1μg）的该组分加到第0号塔板上，分配平衡后，由于k=1，即ns=nm故nm=ns=0.5。当一个板体积（lΔV）的载气以脉动形式进入0号板时，就将气相中含有nm部分组分的载气顶到1号板上，此时0号板液相（或固相）中ns部分组分及1号板气相中的nm部分组分，将各自在两相间重新分配。故0号板上所含组分总量为0.5，其中气液（或气固）两相各为0.25而1号板上所含总量同样为0.5．气液（或气固）相亦各为0.25。以后每当一个新的板体积载气以脉动式进入色谱柱时，上述过程就重复一次(见下表)。 按上述分配过程，对于n=5，k=1，m=1的体系，随着脉动进入柱中板体积载气的增加，组分分布在柱内任一板上的总量（气液两相中的总质量）,由塔板理论可建流出曲线方程： m为组分质量，Vr为保留体积，n为理论塔板数。 当流动相体积V=Vr 时，C值最大，即 从上两式可以看出，色谱峰W越小，n就越大，而H就越小，柱效能越高。因此，n和H是描述柱效能的指标。 通常填充色谱柱的n＞103，H＜1mm。而毛细管柱 n=105--106，H＜0.5mm 由于死时间tM包括在tR中,而实际的tM不参与柱内分配,所计算的n值尽大,H很小,但与实际柱效能相差甚远.所以,提出把tM扣除,采用有效理论塔板数neff和有效塔板高Heff评价柱效能。 塔板理论的优点 塔板理论用热力学观点形象地描述了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，并成功地解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，还提出了计算和评价柱效的参数。 塔板理论的特点和不足 三、两物质在色谱柱的分配及流出曲线 第二节 色谱法中常用的术语和参数 一、色谱常用的术语和参数 色谱图是以组分的响应信号（或浓度）为纵坐标，时间为横坐标的色谱流出曲线；它提供定性和定量分析的依据及色谱操作条件的有关信息。 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内，色谱峰如果对称，可用Gauss正态分布函数表示： 式中：C—不同时间t时某物质的浓度，C0—进样浓度，tr—保留时间