拟南芥叶绿体血红素加氧酶AtHO1基因的克隆和-基因组资源试验室.PDF

第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报 31 3 Vol.31 No.3 年 月 , 2012 6 JournalofHuazhon A riculturalUniversit June2012281~286 g g y 拟南芥叶绿体血红素加氧酶 AtHO 1 基因的克隆和多克隆抗血清制备 曾海洋 罗美中 , 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 武汉 430070 , 摘要 为研究叶绿体血红素加氧酶 的生物学功能和分子作用机制 构建了拟南芥血红素加氧酶基因 HO1 , ( ) AtHO1的重组融合蛋白表达载体 pET28aAtHO1质粒转化到EscherichiacoliBL21DE3中诱导表达重组蛋 - 。 , , , 。 白 经 SDS电泳检测 AtHO1的重组融合蛋白获得了高效表达 分子质量为 28~36ku且为可溶蛋白 , 。 重组蛋白经 NiNTA亲和层析法纯化后 得到纯度较高的蛋白 纯化产物免疫新西兰大耳兔获得了专一识别重 - , , , 组蛋白6×HisAtHO1的抗血清 进一步提取拟南芥和水稻叶片总蛋白 蛋白质印迹检测显示 在分子质量 - , 28~36ku之间出现特异性条带 证明用重组蛋白6×HisAtHO1制备的多克隆抗血清可以与拟南芥和水稻 - , 。 HO1蛋白特异性结合 说明拟南芥 HO1的抗血清能够用于水稻 HO1的功能分析和应用研究 ; ; ; ; 关键词 拟南芥 水稻 叶绿体血红素加氧酶 原核表达 蛋白质印迹 中图分类号 文献标识码 文章编号 ( ) Q785 A 1000-2421201203-0281-06 血红素加氧酶( , )是 ),参与植物光敏色素的生物合 hemeox enaseHO Ten hemeox enase1 yg - yg - [] 1 , ,