高三生物《多聚酶链式反应扩增dna片段》(课件).ppt

?② RNA引物的合成 　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?③ DNA的生成 　　以DNA单链为模板，在DNA聚合酶的作用下，在RNA引物的末端由5′端→3′端合成DNA。 DNA合成的方向 子链由5′ 端向 3′端延伸 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 DNA复制的前提是______________； 用_________________方法 　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ 双链的解开 控制温度 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 DNA 分子的热变性原理： DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。 托马斯.布鲁克 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) ①DNA模板； ②分别与两条模板链相结合的两种引物； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶； ⑤ 控制温度，但不需解旋酶。 体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) （三） PCR的反应过程 1、PCR的反应步骤 1、PCR的反应步骤 　　PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 （三） PCR的反应过程 ①变性（模板DNA解旋） 　　模板DNA加热至900C以上时，模板DNA双链解离，成为单链。 2、循环过程 靶序列 靶序列 PCR 循环第一步 ：加热变性 ②复性（退火） 　　温度下降到50℃左右，两种引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 PCR 循环第二步 ：引物与靶序列退火 ③延伸 　　温度上升到72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链 PCR 循环第三步 ：引物延伸 靶序列 靶序列 第1个 PCR 循环完成后 ：得到两个拷贝的靶序列 95℃变性 （1）PCR循环——变性 （1）PCR循环——变性 95℃变性 95℃变性 （1）PCR循环——变性 55℃复性 （2）PCR循环—复性 湖南长郡卫星远程学校 2009年下学期 制作 03 多聚酶链式反应扩增DNA片段 一、基础知识 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 2、基本单位 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 脱氧核苷酸 2、基本单位 （一）DNA分子的结构 一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素 脱氧核苷酸 2、基本单位 3、脱氧核苷酸结构 （一）DNA分子的结构 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 5’ 3’ 3’ 5’ 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5’ 3’ 多脱氧核苷酸链结构简图 连 接 A T G C 连 接 A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 连 接 A T G C A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 连 接 A T G C A T G C 5端含磷酸基团 3端（含羟基） 3端 5端 4、DNA分子的双螺旋结构 4、DNA分子的双螺旋结构 　　① DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链（即一条链为3′→5′，另一条链为5′→3′）盘旋而成的规则双螺旋结构。 4、DNA分子的双螺旋结构 　　②脱氧核糖与磷酸交替连接，排列在外侧，构成基本骨架；碱基排列在链的内侧。 　　① DNA分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链（即一条链为3′→5′，另一条链为5′→3′）盘