第五课蛋白质和多肽及氨基酸序列测定.pptVIP

第五课蛋白质和多肽的氨基酸序列测定 蛋白质和多肽是由20种氨基酸按照一定的顺序通过肽键连接成一长 链，然后通过链内、链间的离子键、疏水作用等多种作用力进行折叠、 卷曲形成一定的构象并发挥其独特作用。氨基酸的排列顺序即蛋白质的 一级结构决定了蛋白质的高级结构及功能。因此，测定蛋白质的氨基酸 序列是进行蛋白质结构功能研究中不可缺少的部分。另外，蛋白质一级 结构的信息也有助于对其基因结构的研究。 目前，进行蛋白质序列测定有两个关键步骤，即： ①氨基酸残基一个一个依次从蛋白质和多肽的末端切割下来； ②正确鉴定每次切割下来的氨基酸残基。 其中第一步可采用化学法或酶法进行裂解。由于化学法较之酶法具有 裂解率高、易于自动化、耗费少等诸多优点，被蛋白质化学实验室普遍 采用，可以从蛋白质和多肽的N端进行裂解，也可以从C端进行分析。 第二步通常是在氨基酸残基上衍生了一个生色基团，通过高效液相色 谱进行分离分析。 本章将就蛋白质和多肽的N端、C端氨基酸序列分析 的原理和方法、进行序列分析前蛋白质和多肽样品的准备作一介绍。 第一节 N端分析原理 一、耦 联 蛋白质和多肽的自由α—氨基经与异硫氰酸苯酯(PITC)试 剂耦联后，与其紧邻的第二个残基的键合力大大减弱，很容 易断裂。 二、裂 解 在无水条件下酸裂解，仅仅切下反应的那个残基。紧挨的 第