第四章 克隆载体及特征及类型.pptVIP

第四章 基因克隆的载体 载体：携带外源DNA进入宿主细胞的工具。 能够运载外源DNA片段（目的基因）进入受体细胞，具有自我复制能力，使外源DNA片段在受体细胞中得到扩增和表达，不被受体细胞的酶系统所破坏的一类DNA分子。 质粒 重要的大肠杆菌质粒载体 pGEM-3Z： 多拷贝 装有两个噬菌体的强启动子 装有多克隆位点（MCS） 正选择颜色标记 lacZ’ 用于外源基因的高效表达 注意：T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合 2743 bp MCS lacZ’ PT7 ori Apr pGEM-3E PSP6 酶所识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶，如： E.coli BL21（DE3）等 在重组的pGEM3Z载体中加入相应的RNA聚合酶，可以发生外源基因转录。 质粒载体总体评价 操作简便 克隆容量有限（ 10kb） 第二节 噬菌体或病毒DNA 噬菌体或病毒是一类非细胞微生物，能高效率高特异性地侵染 宿主细胞，然后或自主复制繁殖，或整合入宿主基因组中潜伏 起来。 高效率的感染性能使外源基因高效导入受体细胞 自主复制繁殖性能使外源基因在受体细胞中高效扩增 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的 l 噬菌体DNA l 噬菌体的生物学特性： 生物结构 l 噬菌体由外壳包装蛋白和l-DNA组成 l-DNA全长48502个核苷酸 l-DNA上至少有61个基因 约有