DNA浓度测定-黑龙江生物科技职业学院.PPTVIP

黑龙江生物科技职业学院 生物制药技术 生物分离技术 主讲人：张爱华 实训四 DNA制备 实验原理 2 材料用具 3 操作方法 4 目的要求 2 1 5 5 注意事项 目的要求 了解密度梯度离心分离原理，了解DNA粗提方法。 掌握密度梯度离心制作过程及方法。 原理 在较大的离心力作用下，不同的DNA 由于其大小、形状 和密度不同，而悬浮在不同密度的位置上，从而达到分离。 核酸分子中的碱基含有共轭双键，具有一定的紫外吸收特 性，其最大吸收峰的波长为260nm。在波长为260nm，光程 为1cm，A260＝1时，相当于双链DNA浓度为50μg/mL，单 链DNA为40μg/mL。紫外分光光度法可用于测定浓度大于 0.25μg/mL的核酸浓度。 DNA浓度计算公式：C（μg/mL）＝40μg/mL×1/光程×A260 ×稀释倍数。 材料用具 新鲜的鸡肝 生理盐水（冷）、5%十二烷基磺酸钠溶液、45%乙醇、95%乙醇（冷）、 乙醇（冷）、丙酮（冷）、氯化钠粉末、5%、10%、20%、30%蔗糖溶 液（5%蔗糖溶液配制：称取蔗糖5g溶于100mL 蒸馏水液中，加5g活性 炭，于沸水浴中加热25min，过滤取清液） 离心机、灭菌离心管（10mL）、烧杯（1L）、大三角瓶、天平、量 筒、匀浆机、1.0mL注射器、超速离心机、No.22针头、紫外分光光 度