分子生物学绪论学年.ppt

* cDNA芯片 核酸-核酸杂交 原理：将生物活性物质以点阵方式有序固定在载体（芯片），在特 定条件下与荧光标记的样品进行杂交-反杂交，然后，进行 检测。 步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测和结果分析 特点和优势：① 速度快。杂交时间可以缩短在一分钟以内； ② 效率高。在一张芯片上检测数千个基因； ③ 成本降低，检测更多样化； ④ 自动化程度高，减少人为误差。 应用：基因表达检测；SNP检测（基因分型）；基因测序分析 * 是应用特异性抗体检测靶蛋白，是蛋白水平检测或研究基因表达与功能的方法。 Western Blot 蛋白质-蛋白质 应用：（1）检测蛋白质分子量大小（依电泳迁 移率估计） （2）蛋白质含量，即基因表达水平高低 （密度扫描仪，定量分析） * Western印迹杂交 蛋白质-蛋白质 * 免疫沉淀反应(Immunoprecipitation) 原理：抗原-抗体反应 可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。 蛋白质-蛋白质 * 蛋白质-蛋白质 蛋白质芯片 抗原-抗体反应 * 核酸-蛋白质 染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） 体内研究转录因子与基因启动子结合能力 细胞固定 染色质断裂 免疫沉淀 交联反应的逆转和DNA的纯化 DNA的鉴定 * 核酸-蛋白质 电泳迁移率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA) 体外研究转录因子与基因启动子结合能力 * 1.1.3 * 根据类型常可区分为有丝分裂（mitosis）和无丝分裂，在真核生物中以有丝分裂尤为重要，它不改变染色体的倍数。 细胞分裂的另外一种形式是减数分裂（meiosis）。减数分裂产生染色体倍数减半的生殖细胞，即配子，这是有性生殖的必要条件。 如果细胞分裂失去控制，常常导致特定细胞团的增生，异生或肿瘤。严重的情况下发生恶性肿瘤，其中上皮组织来源的被称为癌症。人类认识染色体已经有100多年的历史了．1882年，德国细胞学家弗鲁门（W．Flemming）在研究细胞分裂时，发现细胞核中有易被碱性染料染上颜色的物质，把它称为染色质 30多年前，遗传学家却一直不清楚．有的遗传学家提出人的染色体数目与大猩猩、黑猩猩一样都是48条．1952年，在美国德克萨斯大学工作的美籍华人徐道觉博士意外的发现了人的染色体数目．一天，他对在常规组织培养下的细胞进行观察，无意中发现显微镜下出现铺展得很好的染色体，杂色体数目为46条，而不是48条．后来，徐道觉博士花了三个月的时间搞清了“奇迹”出现的原因，不知实验室的哪位实验员把配制的冲洗培养细胞的平衡溶液误配成低渗溶液，细胞膜在低渗溶液中容易涨破，所以染色体逸出，铺展良好，清晰可辨．遗憾的是，虽然徐道觉博士发现了人类染色体不是48条，而是46条，但是由于种种原因，他没有坚持自己的发现．1956年，华裔学者庄有兴和他的同事通过实验证明了人的染色体是46条，并发表了实验结果．为此，庄有兴荣获美国肯尼迪国际奖． 沃尔特·萨顿（Walter sutton）美国遗传学家，生物学家。他提出 “基因在染色体上”。摩尔根及其学生的实验研究加以证明并发展成为遗传学理论，它是经典遗传学的核心内容之一。 * 托马斯·亨特·摩尔根 (Thomas Hunt Morgan) 是美国进化生物学家，遗传学家和胚胎学家。发现了染色体的遗传机制，创立染色体遗传理论， 是现代实验生物学奠基人。于1933年由于发现染色体在遗传中的作用， 赢得了诺贝尔生理学或医学奖。 在19 摩尔根 10年5月，在摩尔根的实验室中诞生了一只白眼雄果蝇。摩尔根把它带回家中，把它放在床边的一只瓶子中，白天把它带回实验室，不久他把这只果蝇与另一只红眼雌果蝇进行交配，在下一代果蝇中产生了全是红眼的果蝇，一共是1240只。后来摩尔根让一只白眼雌果蝇与一只正常的雄果蝇交配。却在其后代中得到一半是红眼、一半是白眼的雄果蝇，而雌果蝇中却没有白眼，全部雌性都长有正常的红眼睛。摩尔根对此现象如何解释呢？他说：“眼睛的颜色基因（R）与性别决定的基因是结在一起的，即在X染色体上。”或者像我们现在所说那样是链锁的，那样得到一条既带有白眼基因的X染色体，又有一条Y染色体的话，即发育为白眼雄果蝇。 摩尔根及其同事、学生用果蝇做实验材料。到1925年已经在这个小生物身上发现它有四对染色体，并鉴定了约100个不同的基因。并且由交配试验而确定链锁的程度，可以