水稻P0491E01基因调控花药发育的功能分析(简报).pdfVIP

第39卷第5期 分子细胞生物学报 V01．39．No．5 2006年10月 ofMolecularCell 0ctober2006 Joumal Biology 水稻删9JEDJ基因调控花药发育的功能分析(简报)术 俞竹青朱骏 高菊芳杨仲南” (上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234) 关键词：水稻花药发育RNA干涉RT—PCR 高等植物的花药发育是包含基因不同程度相 互作用的复杂发育过程，一般可分为两个阶段。第一 3’)，连入T载体，构建成中问载体pINl35。然后，从 个是花药的形态建成阶段，在这一阶段中细胞与组 织发生分化．小孢子母细胞进行减数分裂形成四分 体小孢子。第二个是花粉的形成和成熟阶段，在这 TAC vector 一阶段细胞开始衰退、凋亡，小孢子进行有丝分裂、 CC一3’)，将这一片段连接于pMDl8一T 分化发育成成熟花粉，花药膨大并被花丝托到合适 的位置，组织发生衰退开裂，花粉囊破裂．花粉粒释 放…。在整个花药发育过程中有大量的基因在花药 各组织中表达．据估计仅特异性表达的基因就有 3500个左右[引。而其中60一100个基因为花粉发育 所必需的．这其中任何一个基因的突变都会导致雄 将回收片段连人含35S启动子和终止子的中间载体 性不育[3]。目前在拟南芥中已分离克隆到二十多个 pRTL22KpnI位点。最后用日i凡dⅢ酶切，将回收片 与育性相关的花药特异表达基因。其中，A￡DADj INANTHER 0DEFECT|vE DEHlsCENCEi、)基因是 茉莉酮酸合成的关键基因，该基因突变后，由于花 药不能开裂而导致不育[引。通过同源性比较，我们发 现水稻中删9JEDJ基因与拟南芥A￡DADJ基因高子片段(分别以相反方向连人内含子的上、下游)。通 度同源。本实验采用反向遗传学的方法，利用RNA 过PCR检测表明目的片段已成功插入载体中。用热 干涉技术抑制水稻删9JEDJ基因的表达，通过对 转基因植株的表型观察、细胞学观察和该基因表达 根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因植株的获得 情况的鉴定。初步分析了该基因在水稻花药发育过 采用农杆菌介导的方法对dsRNA表达载体进 程中的功能。实验结果表明删9JEDJ在花药发育行水稻的遗传转化。以粳稻品种日本晴(O．sm西口 后期花粉的成熟过程中起重要的调控作用。 ／印onico．)的成熟胚为材料，诱导愈伤组织[7|。用含 。针对朋锣JE以基因的dsl矾A表达载体的构建 RNA干涉fRNAinterference，RNAi)是由双链黑暗下共培养3d。抗性愈伤组织的筛选及植株再生 RNA(double—strandedRNA，dsRNA)引起的转录后基参照刘巧泉等[，】的方法。实验发现，抗性愈伤在分化 因沉默．能有效抑制特异基因的表达，进而调控细 培养基上培养10d后即开始出现绿点，2—3周后出 胞的各种生命活动[引。 现小苗．且生长健壮。本实验共得到10棵抗性植株。 根据RNA干涉的原理，构建了针对脓9，肋J 基因的dsRNA表达载体。首先，将pBluescriptSK载 体用EcoRv酶切，在此位点上加入T尾，构建成T +上海市教育发展基金会及上海市教委曙光计划和科技 载体[引。再从水稻基因组DNA中克隆BJOD8CD，■部973计划(2005CBl20802)的资助。 7一GAGGTGAGGGrIT][TI’CG． 基因的第一内含子(INF．5 ”通讯作者，E—mail：znyang@shnu．edu．dn 俞竹青朱骏高菊芳杨仲南