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骨科论文（一） 骨 库 的 建 立 及 临 床 应 用 何玉翔? 摘要 冷冻保存同种异体骨和骨软骨在修补大块骨缺损及骨关节移植的应用中具有重要意义。异体骨供体的选择和取材应遵守美国组织库协会制定的基本标准。异体骨的保存方法有深低温冷冻法、冻干法和辐照灭菌法，这些方法各有特点。临床使用异体骨时，应根据患者的需要和骨库的记录资料合理选择，并注意有关据体操组规程。最后总结了同种异体骨和骨软骨移植手术210例，未见明显的排斥反应，疗效满意。 关键词 冷冻保存 同种异体 骨 软骨 随着现代矫形外科技术的快速发展，大块骨缺损以及关节软骨损伤后的修复问题已成为较普遍和棘手的问题，长期以来一直没有得到彻底的解决。虽然自体骨软骨具有免疫反应，能快速结合等优点，但来源有限，常需另做切口，增加病人的痛苦和失血，且造成自体另一部分的骨软骨缺损；各种人工合成假体使用简便，能即刻修复损伤部位，恢复一定的关节活动，但因其缺乏生物活性，不能与受体部位发生生物接合，容易产生松动、磨损和疲劳断裂等问题，尤其不适合年轻病人[1，2]，而同种异体骨软骨来源广泛，大小形状不受限制，且具有生物活性与受体部位能发生生物结合，同时可保留肌肉、韧带及关节囊等附着点，为重建关节和植提供能提供了方便和保证。特别是近年来由于异体骨软骨免疫学研究的进展及近代冷藏技术的提高，阐明了冷冻保存能够降低异体骨软骨的抗原性并加快愈合速度，从而为同种异体骨的临床应用提供了理论基础和技术保障。我所自1993年起建立了同种异体骨库，并与上海市瑞金医院骨科合作，用于临床大块骨和骨软骨缺损病例的移植手术，截至1995年5月共做210例，疗效满意。 一 、供体的选择和取骨方法 Anti—H同种异体骨来源于新鲜尸体。为了保证异体骨的安全使用，选择捐献者应遵守美国组织库协会（AATB）制定的基本标准[3]：（1）无感染性疾病。（2）无静脉用药史。（3）无长期肾上腺皮质激素使用史。（6）无72小时以上人工呼吸或支持呼吸应用史。（7）无体表深伤口。 捐献者年龄以15～45岁为佳，死前应作血、尿及其他体液的细菌培养和生化检查，包括（1）培养：细菌培养（包括需氧和厌氧菌）、真菌培养、血液培养，（2）病毒检测：艾滋病毒检测（Anti—HIV—I）、肝炎病毒检测（HbsAg、bcAg），（3）其它：如每毒检测（RPR—R—reactive protein），以确保异体骨的安全性。取骨应在死后12小时内完成，若有冷冻条件可延长至24小时内完成。取骨应在严格无菌条件下进行，有专门的技术人员根据骨库需要及取骨部位差异分别采用不同的切口。在切带关节面的异体骨时，应注意对关节面的保护。同时应保留附着于骨端的重要肌肉，韧带和关节囊等组织的附着点，以便在关节移植时重建。 异体骨取下之后，应尽量去除骨膜、多余的骨端附着组织及骨髓，然后应无菌生理盐水洗净，并常规送骨膜、骨随及附着组织三套标本做需氧和厌氧菌培养。所有操作应在严格的无菌条件下进行。 二 、同种异体骨和骨软骨的保存 目前常用的保存的方法有以下几种： 1．深低温冷冻法：将异体骨用三层无菌手术巾包裹后，置于-70℃以下的深低温环境中保存。 2．冻干法：将异体骨送入冻干机中制成冻干骨后置于无菌真空容器中常温保存。 3．辐照灭菌法：异体骨经预包装后进行γ射线辐照灭菌（剂量位15～25KGY）然后置于-30℃以下低温环境中保存。 对于上述保存方法，我们的经验：深冻法和冻干法可降低异体骨的抗原性，对骨诱导、骨传导以及骨生物力学方面的影响较小，因而是较理想的保存方法。冻干骨还可常温保存，便于运输。但这两种方法在取材和保存阶段的无菌要求非常高，需要一定的设施和装置。 附照法虽然在一定程度上影响骨的诱导能力，但其优点是可二次灭菌（包括AIDS和肝炎病毒的灭活）。由于γ射线有较强的穿透能力，因而可穿透塑料袋实现预包装。另外，辐照也可降低异体骨的抗原性，从而更加减弱了同种骨移植后的排斥反应。目前，AATB建议辐照灭菌剂量应控制在15～25KGY[4]，这既能达到灭菌目的，又不足以引起骨的生物力学改变，并仍可保留部分骨诱导能力。需要强调的是，带软骨的骨关节移植物不能用冻干法和辐照法灭菌保存，最好使用3天之内获取的新鲜同种异体骨软骨，也可使用深低温冷冻法，但应注意先将软骨面浸泡于含10%DMSO的林格氏液中，在4℃环境下保存30分钟，然后以缓慢的速度（0.05℃/min）降至-40℃，再快速置于-70℃以下环境中保存。 置于保存时间，一般认为在-70℃以下的环境中可保存一年以上，而冻干骨则可保存更长时间，不致于引起异体骨生物性能降低。辐照骨经预包装及灭菌后可在-30℃以下地位内环境中保存半年[5，6]。 骨库应有详细的记录制度，记