九龙江水大肠杆菌群测定的实验报告1.docVIP

九龙江水大肠杆菌 群的测定 林淑丽 （漳州师范学院10级生物系食品科学与工程 101304116） 摘要：本文通过多管发酵法、革兰氏染色法两种不同的方法测定九龙江水大肠杆菌群数量。初步掌握多管发酵法及革兰氏染色法。了解大肠杆菌在饮水中的重要性和革兰氏染色原理在细菌分类鉴定的重要性。 关键词：多管发酵法 大肠杆菌 九龙江水 革兰氏阴性 无芽孢杆菌 THE DETERMINATION OF COLIFORM BACTERIA WHICH IN THE JIULONG RIVER Lin Shuli (10Food science and engineering in Biology department, Zhangzhou Normal University 101304116) Abstract: this article through multiple tube fermentation and grams staining method two different methods to determine the Kowloon river escherichia coli group of quantity. Preliminary grasp tube fermentation and grams staining method. Understand the importance of e. coli in drinking water and gram stain principle in the importance of bacteria classification and identification. Keywords: much tube fermentation; E. Coli; the water of Jiulong River; gram-negative; sporeless bacterium 大肠杆菌（学名：Escherichia coli，通常简写为E. coli）)是生活在温血动物（包括鸟类和哺乳动物）大肠中的重要细菌种类，对食物正常消化具有重要作用。技术上，大肠菌群被定义为一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，可利用乳糖在48小时内35℃之下产生气体的杆菌在水净化和污水处理领域，大肠杆菌很早就被选作水污染程度的指示性物种，标志着有多少人类粪便存在于水中，其测量标准为大肠菌群指数。故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。 将灭菌的三根小试管标上1、2、3的记号，各装4.5ml的无菌。充分振荡水样，从中吸取0.5ml于1号试管中，，充分振荡既得1：10的稀释液。同理配置2,3号试管1：100，1：1000的稀释液。 3. 水源水的检查 (1) 初步发酵试验:有50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵瓶中，加入50ml水样（轻度污染水的测定);在1支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨的大发酵管中，加入10ml水样（轻、中度污染水的测定各一支）。 (2) 从原水样、1：10，1：100，1：1000的稀释液各吸取1ml于四支经过灭菌的 装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨中。（每吸取一次，吸头都要换一次） (3) 将上述溶液混匀后，于36摄氏度培养24h，24h未产气的继续培养至48h。记 录其稀释液的产气管数（如图表一），进行复发酵试验。 (4) 平板分离:经24h 培养后，将产酸产气及48h 产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于 伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h,将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。 （5）复发酵试验: 经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阳性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表，即得大肠菌群数。 1.2．2 革兰氏染色 1. 制片 （1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中间加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，制成很薄的涂面，注意取菌不要太多。 （2）晾干：让涂片在酒精灯火焰上方文火烘干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜） 注意： ①要用活跃生产期的幼培养物做革兰氏染色； ②涂片用的载玻片要洁净无油污迹，否则影响涂片。 ③挑菌量应少些，涂片宜薄，过厚重叠的菌体则不易观察清楚。 2. 初染 （