免疫分及析.ppt

第八章 免疫分析(一) 8.2 免疫分析中的分离方法 如何建立一个免疫分析方法，质量作用定律是其基础。它要求： (1)抗原是单一的化学物质。事实上，一个标记的抗原与其未标记的抗原就往往有所不同； (2)抗体也应是均一的； (3)抗原和抗体均应是单价的；在一般情况下是做不到的 (4)抗原与抗体间的反应要达到平衡状态，其微观上是可逆的； (5)结合相或游离相的测定必须准确，而且不受分离不完全或非特异性吸附的影响。 上述条件一般很难都满足 * 所谓免疫分析(Immunoassay)是指利用抗原(Antigen)与抗体(Antibody)之间高特异性的反应(即免疫反应)实现对抗体、抗原或相关物质进行检测的分析方法。 竞争免疫分析示意图 将抗体(Ab)固定于一个固相载体上，然后抗原(Ag)与标记抗原(Ag*)竞争性地与固定化的抗体反应； 将未反应的抗原(通常是被分析的对象)及标记抗原洗去； 检测标记抗原的量，其浓度的大小与待测抗原的量成反比。根据标记物的不同可分为放射免疫分析和非放射免疫分析两大类。 8.1. 抗原、抗体及其反应 抗原和抗体的性质及它们间的反应是建立免疫分析的基础。虽然从表面上看它们之间的反应与一般的化学反应很相似，但在实际应用时要比一般的试剂分析复杂得多。只有对它们的性质有了很好的了解,才能建立一种真正有效的分析方法。 8. 1.1 抗原 在免疫分析中抗原往往作为被分析的对象出现，对它的了解包括与抗体制备相关的性质及抗原标记两个方面。 基本概念 能引起动物机体特异性免疫应答的化学物质叫抗原(Antigen, Ag)，通过这种免疫应答所产生的，能够与抗原发生特异性反应的蛋白质就是抗体(Antibody, Ab)。抗原具有免疫原性(Immunogenicity)和抗原性(Antigenicity)两种特性。 免疫原性是指引起免疫应答的性质，而抗原性则是指与抗体反应的性质，两者并不一致。具有免疫原性的物质必然有抗原性，反之则不一定成立，如半抗原(Hapten)，它具有抗原性，但不具备免疫原性。 半抗原是指那些不能引起免疫应答，却能与抗体反应的一类小分子，它们相当于抗原分子上的一个抗原决定簇(Determinant)，即抗原分子上与抗体结合的一个区域。一般来说，抗原并没有明显的结构特征使之与非抗原化学物质得以区别，所以关键要看它是否能引发免疫应答。 抗原性的化学基础 抗原性与抗原的化学结构有着密不可分的关系，它不仅与高特异性、高亲和性抗体的制备相关，而且与免疫分析中标记抗原的设计有关，尤其是对与半抗原相关的分析体系更是如此。 抗血清对半抗原及其类似物反应的特异性研究示意图 抗血清与抗原及其类似物沉淀反应的情况(沉淀量) 注：符号“＋”代表有沉淀，“－”代表未观察到沉淀，“±”代表有沉淀和没有沉淀之间 免疫原性的化学基础 化合物免疫原性的化学基础并不像抗原性的化学基础那样清楚，但发现它也与其结构紧密相关。抗原的一些特征如下： (1)抗原对免疫对象来说是外来物质，也就是说，抗原的结构要新异，要使生物体能够识别它是非己的，这样才能有效地刺激免疫系统产生免疫应答，即具有免疫原性。 例如，兔子可以对人血清白蛋白产生免疫应答，但不会对兔血清白蛋白产生免疫应答。 (2)抗原一般都是一个复杂的大分子，其分子量一般大于5000，这里复杂不仅指要有比较大的分子量，而且在组成及立体化学结构上也要具有复杂性，而不是一个简单的聚合物，如尼龙、聚苯乙烯及聚丙烯酰胺．它们的分子量虽然都很大，但不具有免疫原性。 关于分子大小的要求这一点并不绝对，如人们已发现砷酸、酪氨酸、赖氨酸取代的2，4－二硝基苯及胰岛素(分子量约为1500)等小分子量的化合物也具有免疫原性。 (3)抗原的免疫原性还与免疫原的分子表层基团有关，对蛋白质抗原。它还与氨基酸的组成相关。例如，多聚赖氨酸无免疫原性，在其外层接上一层丙氨酸或甘氨酸，它仍无免疫原性，但若外层接的是酪氨酸，则它会表现出免疫原性．由此可见，带芳香环氨基酸，或者说结构较为复杂的氨基酸对免疫原性有重要的贡献。 8.1.2 抗体 抗体是一类统称为免疫球蛋白(Immunoglobulin，简写为Ig)的蛋白质。是机体免疫力的一类重要物质基础，也是医学中用于疾病诊断、治疗、预防和研究发病机理的极为重要的试剂及制剂。抗体的性能对免疫分析是至关重要的。 Porter，1962 IgG 分子的基本结构 免疫球蛋白是具有抗体活性的一类蛋白质，目前被人们所认识的免疫球蛋白可分为IgG、1gM、IgA、IgI)和IgE五种类型，分别称作免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、……。用免疫学方法研究表明，这五种类型免疫球蛋白的主要区别在于重链序列的不同．但链的长度基本相