乙型脑炎病毒分子流行病学、诊断及重组疫苗研究.pdfVIP

中文摘要 乙型脑炎病毒分子流行病学、诊断及重组疫苗研究 流行性乙型脑炎病毒（JEV ）主要由三带喙库蚊传播的自然疫源性疾病，猪群是 JEV 储存宿主，在乙型脑炎的流行中起重要作用。JE 在亚洲地区普遍流行，每年约 3-5 万人感 染， 死亡 1-1.5 万人。乙脑病毒同样也给养猪行业，尤其是我国西南地区畜牧业原本不发 达地区造成重大的经济损失，母猪感染病毒后可出现流产、仔猪发育不良或木乃伊胎等症 状。 云南省景洪市位于中缅边境，属于虫媒病毒病流行的主要地区，因此在该地区开展虫 媒病毒调查尤其是乙型脑炎病毒的分子流行病学研究有重大意义。本研究对云南景洪地区 蚊虫和猪脑组织样品进行 JEV 分子流行病学调查，用常规 PCR 方法检测 430 份蚊虫样品和 108 份猪脑组织样品扩增 JEV Ⅰ和JEV Ⅲ 保守区 NS1 非结构蛋白基因，结果发现蚊虫样 品中 C. tritaeniorhynchus （三带喙库蚊）JEV 感染率为 13.2% （57/430 ）， A. sinensis （中华 按蚊）为 2.7% （3/430 ），A. subalbatus （骚扰阿蚊）0.7% （3/430 ），仔猪脑组织样品阳性 率为 18.5% （20/108 ）。并从阳性样品扩增 JEV 结构蛋白基因 E ，结果从 C. tritaeniorhynchus、A. sinensis 和猪样品中分别得到 8 份、5 份和 3 份阳性结果。对这 16 份 样品进行序列分析发现与基因Ⅲ型 JEV 序列相似率最高为 99.7% 。未检测出基因Ⅰ型 JEV 。可以推测基因Ⅲ型 JEV 是云南地区主要流行基因型。我们又用云南省寄生虫防治所 提供的人和猪 JEV E 基因序列进行进一步对比分析。结果发现云南省蚊源中 （Cx.tritaeniorhynchus 6 个、A n.sinensis 4 个）JEV 序列分别与人源 JEV 序列完全相同，而 猪源 JEV 与人源 JEV 序列相似率为 96.2%-98.6%，亲缘关系比较接近。 本次流行病学调查成功从猪脑组织和蚊虫样品中成功分离出 2 株 JEV 病毒 Yunnan 0901 和 Yunnan 0902 株 （GenBank accession numbers JQ086762 和 JQ086763 ） 。获得2 株 JEV Ⅲ全基因序列，并与以前在其它地区和时间分离的 JEV 全基因进行对比分析。其中 Yunnan0901 株和 Yunnan0902 株 5’-NCR 端均有 1 个碱基发生置换，置换率均为 1.05%而氨 基酸均未发生改变。结构蛋白基因中 Capsid 基因分别有 2 和 1 个碱基发生置换，置换率分 别为 0.52%和 0.26% Yunnan0901 株氨基酸未发生改变而 Yunnan0902 株则有 1 个氨基酸发 生改变。Membrane 基因分别有 3 和 1 个碱基发生置换，置换率分别为 0.59 和 0.20% ， Yunnan0902 株氨基酸未发生改变而 Yunnan0901 株则有 1 个氨基酸发生改变。Envelope 基 因分别有 10 个和 4 个碱基发生置换，置换率分别为 0.67%和 0.27% Yunnan0901 株有 9 个、 Yunnan0902 株有 3 个氨基酸发生改变， NS5 基因分别有 25 个和 16 个碱基发生置换，置换 率为 0.91%和 0.59%其中 Yunnan0901 株有 18 个、Yunnan0902 株有 9 个氨基酸改变。3’- I NCR 端碱基均未改变。该结果说明猪是病毒的储存宿主而且容易引起病毒的变异。将 Yunnan 0901 和 Yunnan 0902 分离株的 E 基因与 93 株 JEV E 基因进行对比，为 JEV 的基因 进化提供依据。 由于乙脑病毒的分离只有在病毒血症时期的外周血中可分离到。目前最常用的猪 JEV 诊断是用 ELISA 方法，检查血液或脑脊液中抗体。但是血清学方法在检查 JEV 时会与其他 病毒有较大的交叉反应 。常用的猪乙型脑炎病毒检测主要是 RT-PCR 和 real-time