小鼠心室肌脱细胞化细胞外基质薄片的制备和评价-生理学报.PDF

生理学报Acta Physiologica Sinica , December 25, 2014, 66(6): 709–717 709 DOI: 10.13294/j.aps.2014.0084 研究论文 小鼠心室肌脱细胞化细胞外基质薄片的制备和评价 姜煜东，李文思，余翀，王璐，孙小夕，席姣娅* 华中科技大学同济医学院基础医学院生理学系，中德干细胞中心，湖北省药物靶向研究评价重点实验室，武汉 430030 摘 要：心肌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)可由心肌经脱细胞处理制得，被广泛认为是一种理想的制备工程心肌的生 物支架材料。然而目前的脱细胞方法尚存在不足，本研究拟联合使用经典去垢剂改良脱细胞方法，制备性能更为优良的心 肌ECM薄片，以用于构建工程心肌片。用振荡切片机将包埋于低熔点琼脂糖中的成年昆明小白鼠心室肌组织沿心脏横轴切 300 μm SDS (0.1% SDS ) (0.1% SDS 0.5% Triton X-100 成 厚的薄片，随机分为正常对照组、 脱细胞组 处理和改良脱细胞组 和 联合 ) RNA HE ECM 处理 。通过总 和总蛋白质含量分析、 染色和免疫荧光染色等方法评估各组的脱细胞程度和 成分保留状态；将 改良脱细胞组ECM与小鼠胚胎干细胞源心肌细胞(murine embryonic stem cell-derived cardiomyocytes, mES-CMs)和小鼠胚胎成 (murine embryonic fibroblasts, MEFs) SDS ECM 纤维细胞 共培养以检测其生物相容性。结果显示： 脱细胞组和改良脱细胞组 中 RNA HE SDS 残留的总 及蛋白质含量均低于对照组。 染色结果显示改良脱细胞组核质去除较 脱细胞组更彻底。改良脱细胞组 ECM SDS 可见胶原蛋白IV和层粘连蛋白两种 关键成分表达量和分布接近正常心肌组织，而 脱细胞组中这两种蛋白明显减少 mES-CMs MEFs ECM 12 SDS Triton X-100 且分布紊乱。 和 能存活于改良脱细胞组 表面 天以上并向内迁移。综上， 和 联合脱细 胞法制备ECM薄片效果明显，能更好地保留天然ECM成分和结构，具有良好的生物相容性。 关键词：心肌片；组织工程；脱细胞化；细胞外基质 中图分类号：R329.3 ；Q813.1 Acquirement and evaluation of murine ventricular extracellular matrix * JIANG Yu-Do