琼脂糖的质量.PPTVIP

实 验 目 的 通过实验学习从血液中制备染色体DNA的方法。 学习琼脂糖凝胶电泳，检测DNA的纯度、DNA的构型、含量以及分子量的大小。 掌握DNA样品的纯化和定量检测方法。 实 验 原 理 红细胞裂解液裂解红细胞 细胞裂解液裂解白细胞 用蛋白酶K水解蛋白质 有机溶剂酚、氯仿抽提 在高盐条件下，用乙醇沉淀DNA 再用70%乙醇洗除沉淀中的盐分 即可获得染色体DNA 实 验 原 理 实 验 原 理 纯净的DNA A260/A280=1.8，制备的DNA样品应该为1.7~1.8 纯净的RNA A260/A280=2.0，制备的RNA样品应该大于2.0 如果制备的DNA样品A260/A2801.7，说明样品中含酶和蛋白质过高，应将样品用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀DNA； A260/A2802，说明样品中RNA过高，可用RNase消化后，用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀DNA； 如果样品A260/A280为1.8~2.0，说明样品中盐的含量过高，样品沉淀后应用70%乙醇多洗一遍。 提取的RNA样品A260/A280应大于1.80。RNA样品含有蛋白质会使A260/A280比值下降。 实 验 材 料 实 验 材 料 酚：氯仿：异戊醇（25：4：1） 70%乙醇 TE buffer RNAse 琼脂糖 TAE电泳缓冲液 电泳设备 紫外分光光度计 凝胶成像系统 染色