编码普通野生稻磷酸盐转运蛋白基因片段的分离与-中国科技论文在线.PDFVIP

第 4l卷 第 5期 ． 复 旦 学 报 (自然科学版) Vo1．4lNo．5 2002年 l0月 rI】II()fFudanU1fiversitv (NaturalScience) 0Ct．2002 文章编号 2002】050588—05 编码普通野生稻磷酸盐转运蛋 白 基因片段的分离与克隆 明 凤 ，梁 斌 ，叶鸣明，沈大棱 (复旦大学 生命 科学学院 遗传 学研究所 ，基因多样性 与设计农业研 究中心 ，上海 200433) 摘 要 ：以云南普通野 生稻基因组 DNA为模板 ，根据 GeneBank中登记的编码小麦高亲和力磷 酸转运蛋 白基 因 保 守序列设计一对 特异引物 ，利用多 聚酶链 反应技术 (PCR)，扩增 出 目标基 因 (c∞rpt)1002bp长 度的基 因片段 并克隆到载体 pGEM T．经 DIG标记探针杂交检测初筛 、限制性 内切酶酶切 、PCR扩增 、DNA序列分析与可 能 氨基酸序列 同源性 比较 ，此推定的氨基酸序列与小麦 、水稻 、拟南芥 、番茄磷酸盐转运蛋 白同源性很高 ，初步认为 此基 因片段为普通野生稻耐低磷胁迫相关磷酸盐转运 蛋 白的编码基 因，获得全长序列与基 因表达 的进一步研究 正在进 行 中． 关键 词 ：普 通野生稻 ；磷 酸盐转运蛋 白；PCR扩增 ；同源性 中图分类号 ：Q74 文献标识码 ：A 土壤缺磷是世界范围内普遍存在的问题．据统计全世界土壤中有 43％耕地面积存在不 同程度 的缺磷 问题，我国有 2／3的耕地缺磷 ，尤以我国南方 的酸性土壤的磷素短缺为重．土壤缺磷严重 ，再加上磷肥利 用效率低 、磷矿资源不丰富 、大量施肥造成污染等 问题的 日益突 出，使得科学 家们将研 究课 题集 中于发展 对生态环境具有高效益、低投入 、少污染的农作物生产途径 ，即挖掘植物利用土壤磷素的自身潜力 ，及培育 适应低磷胁迫的作物品种 ． 植物在低磷环境下，限制植株生长的主要因子为植物对磷的吸收能力 ，而其中根系磷酸盐吸收转运蛋 白的重要性尤为突出．目前已从番茄l，、拟南芥E3-5]、小麦 (GeneBank中登记)中克隆与分离出编码磷酸 盐转运蛋白的基因，并且对其功能与表达研究也有相关报道 ．其 中对高亲和力磷酸转运蛋 白基 因的克隆 与表达研究只有在拟南芥_5J与烟草 J中有 报道 ，在水稻中 尚未见报道 ，而 高亲和力 的磷 酸盐转运蛋 白较 低亲和力磷酸盐转运蛋 白对植物适应性增强方面的作用更为突 出l ． 野生稻具有许多优 良性状 ，如抗病性 、抗虫性 、雄性不育与抗逆性 ．根据我们 目前 的初步研究 ，普通野 生稻在低磷逆境下有较强的适应性 ，所 以本研究立足于从野生稻丰富的基 因库 中克隆编码高亲和力的磷 酸盐转运蛋 白的基因片段 ，然后在获得调控与功能区的序列后定 向地改 良植物 ，使其增加对低磷逆境的适 应性 ．目前我们 已建立了普通野生稻的根 cDNAZAP表达库 ，通过DIG标记进行筛库 ，已获得多个 阳性克 隆，第 3次筛选与阳性克隆的转移与测序工作正在进行中，期望能够获得编码水稻高亲和力磷酸转运蛋 白 的全序列 ，并对其基因的功能与表达进行更为深入的研究 ． 1 材料和方法 1．1 材料 (1)菌株为大肠杆菌菌株 DH5a． 收稿 日期 ：2001-06—27 基金项 目：国家博士后基金 资助 (中博基 (中)20031号)；遗传学科创新性基础研 究资助项 目 作者简介 ：明 凤 (1971一)，女 ，博士后 ；通讯联系人沈大棱教授 ． 转载 中国科技论文在线 第 5期 明 风等 ：编码普 通野生稻磷酸盐转 运蛋 白基 因片段 的分离 与克隆 589