SephadexLH-20的应用综述.docxVIP

1. Sephadex LH-20简介 ??? 羟丙基葡聚糖凝胶LH-20是一种Sephadex G-25的羟丙基衍生物，字母LH的含义是这种凝胶骨架在亲脂溶剂中或在水溶剂中都能溶胀。在G-25分子中引入羟丙基以代替分子中羟基上的氢，葡聚糖凝胶分子的葡萄糖部分将与羟丙基形成醚键连接： R—OH――→R—O—CH2CH2CH2OH ??? 与Sephadex G相比，Sephadex LH-20分子中-OH总数虽无改变，但碳原子所占比例却相对增加了，从而使葡聚糖的亲脂性增大。这种凝胶既有亲水性，又有亲脂性，不仅可在水中应用，也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合溶剂中膨润使用，如丁醇、氯仿、四氢呋喃、二氧六环等，应用范围增大，对黄酮、蒽醌、香豆素等成分也能分离。SephadexLH-20除保留有Sephadex G-25原有的分子筛特性，可按分子量大小分离物质外，在有极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱的效果，适用于不同类型有机物的分离，在天然药物分离中得到了越来越广泛的应用。 ??? 使用注意事项：羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20虽然是一种两性凝胶，但由于在不同溶剂中的溶胀因子各不相同（见表1），因此在柱中直接更换溶剂是不允许的，床体积在2.5mL／g干胶以下的不能用于GPC分析。这种凝胶在有机溶剂中分离较小分子量的脂溶性化合物是十分有效的。但在使用时不允许有氧化剂存在。 ??? 再生与保存：Sephadex LH-20价格比较昂贵。用过的Sephadex LH-20可以反复再生使用，而且柱子的洗脱过程往往就是柱子的再生过程。短期不用时可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙醚洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80℃干燥后保存。 ??? Sephadex LH-20不仅具有亲水性能，可以吸水膨胀，而且也有一定的亲脂性，可以吸收有机溶剂而膨胀。在不同的溶剂中，其色谱特性也不同。表1列举了它在不同溶剂中浸泡后吸收溶剂而膨胀的体积。 表1 葡聚糖凝胶LH-20在各种溶剂中的膨胀体积和吸收溶剂的能力 溶????剂溶胀后的体积 (mL/g干凝胶)溶剂吸收率 (mL/g干凝胶)二甲基亚砜4.4～4.6---吡啶4.2～4.4---水4.0～4.42.1二甲基二甲酰胺4.0～4.42.2甲醇3.9～4.31.9氯仿*3.8～4.11.8丙醇3.7～4.0---乙醇**3.6～3.91.8丁醇3.5～3.81.6四氢呋喃3.3～3.61.4二氧六环3.2～3.51.4丙酮2.4～2.60.8四氯化碳1.8～2.2---苯1.6～2.0---乙酸乙酯1.6～2.00.4甲苯1.5～1.60.2[注]*内含10%乙醇；**内含1%苯。 2. 应用 ??? 羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20凝胶不仅可作为一种有效的初步分离手段，还可被用于最后的分离，以除去其中残留的微量固体杂质，盐类或其他外来物质。当化合物的量很少时，人们喜欢在分离的最后阶段使用Sephadex LH-20凝胶，以减少样品的损失，下面列举了部分Sephadex LH-20的应用实例。 2.1. 白花丹参中丹参酮成分的提取 ??? 丹参的干燥根及根茎，性味苦，微寒，因其色红且形状似参而得名“丹参”。丹参的化学成分分为脂溶性和水溶性两大类，丹参的脂溶性部分主要为二萜类化合物，其中大部分为丹参酮型的二萜醌类化合物。董蕊，郑毅男等人利用Sephadex LH-20柱，先用100%甲醇洗脱，分别得4个颜色组分段(黄色段、橙红色段、紫红色段、棕红色段)。再将不同部分进行二次分离，再上Sephadex LH-20柱，分别用50%, 70%甲醇洗脱，用自动部分收集器部分收集，通过上述两次分离得到三个单体化合物。产物通过化学反应、理化常数测定及波谱解析(紫外光谱、质谱和核磁共振)，确定它们的化学结构均为二萜类化合物，分别为:丹参酮IIA,丹参酮I，甘西鼠尾新酮A。其中的甘西鼠尾新酮A是次甲基丹参醌的二聚体，在白花丹参中首次发现。 使用Sephadex LH-20的优点：可以重复利用工业甲醇、乙醇，此方法操作简便、快捷，所分离的化合物纯度较高，得率较大，节省试剂。而传统分离丹参酮的方法：一是应用硅胶柱层析或薄层层析的方法，虽然得到的化合物纯度较高，但操作过于繁杂，而且得量低；二是使用氧化铝柱层析，然后通过分步结晶的方法，虽然得量大，但难于得到很纯的化合物，而且这两种方法在分离的过程中都使用了极性很低的有机溶剂，如：苯，氯仿，二氯甲烷，乙