体内羟自由基检测方法.pdfVIP

※专题论述 食品科学 2004, Vol. 25, No. 10 351 体内羟自由基的检测方法 文 镜，张 西，陈 曦，郭 豫，常 平 (北京联合大学生物活性物质与功能食品北京市重点实验室，北京 100083) 摘 要：在所有的自由基中，·OH的反应活性最强，对机体危害最大。建立可信度高的体内 ·OH的定量检测 方法，对认识自由基损伤的致病机理，筛选抗氧化功能食品，具有重要意义。本文综述了体内 ·OH的检测方 法，包括：芳香族化合物捕获(苯甲酸、苯丙氨酸)-HPLC-ED法，自旋捕集-ESR法等颇具代表性的检测方法，并 对这些方法进行了比较。 关键词：羟自由基；体内实验；高效液相色谱；检测方法 invivo WEN Jing，ZHANG Xi，CHEN Xi，GUO Yu，CHANG Ping Abstract：Of all the ROS that can occurin vivo the· approaches which are used to quantify· mechanisms of· · nance (ESR). We also compared these methods with each other. Key words：hydroxyl radicals；in vivo；HPLC；detection methods 中图分类号：R15；TS218 文献标识码：A 文章编号： 生物体内的氧化过程可提供机体所需的能量，同时 由于羟自由基的寿命极短，体内浓度低，直接进 [5] 也相应的产生各种氧自由基(ROS)，如：单线态氧、超 行体内检测分析极为困难 ，目前国内对于·OH的检 氧阴离子自由基(O2 ·)、羟自由基(·OH)、过氧化自 测仍然集中在体外实验，但体外实验只能作为检测自由 [1] 由基(ROO·) 。自由基形成于生物体的各种生理、生 基、筛选抗氧化物质的初步研究工作，难以全面，真 化的反应过程，正常状态下，体内自由基的产生和清 实的反映抗氧化物质在生物体内的代谢情况，无法预知 除是平衡的，机体会及时清除过多的自由基，防止它 抗氧化物质对生物体的潜在危害，不能代替自由基的体 们过量积累(氧化应激)，避免引起生物大分子被不可逆 内检测，因此，设计与改进可信度高的体内 ·OH的 [2,3] 的破坏，损伤机体，导致疾病和衰老 。 检测方法，研究抗氧化物质对体内 ·OH的清除效果,成 当机体的抗氧化功能衰减，或体内细胞损伤时， 为了非常具有挑战性的工作。 就会生成相对过多的自由基，在各种活性氧自由基中， 1o 1 高效液相色谱法 羟自由基的反应活性最强(二阶速率：10-10/M/S)，对 [4,5] 机体危害最大 ，因为·OH是仅次于F-的强氧化剂， 近些年来发展起来的检测体内 ·OH最为有效的技术 几乎可以和所有的细胞组分(核酸、蛋白质和脂质等)发 是：用无毒的芳香族化合物捕获体内寿命极短的 ·OH， 生反应，故检测体内外羟自由基方法学的建立有着重要 生成稳定的芳香族化合物的羟化衍生物，经HPLC-ED， 意义，不仅有助于深入研究自由基损伤的治病机理，还 HPLC-UV等方法分离、定量分析，可间接推知体内待 可用于筛选、评价具有清除羟自由基能力的生化药品、 测组织中的 ·OH