2017年高中生物 第1章 基因工程 第1节 基因工程概述（第2课时）学案 苏教版选修3.docVIP

第2课时　基因工程的实施过程1．简述基因工程的一般过程。2．理解获取目的基因的方法。(重、难点)3．掌握将目的基因导入受体细胞的方法。(重点)4．掌握目的基因的检测和鉴定方法。(重) 　获取目的基因和构建基因表达载体 1．获取目的基因(1)通过基因文库获取目的基因：基因文库的含义：将某DNA切割成大小合适的片段分别与载体连接起来导入受体菌的群体中储存各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。这个受体菌群体就被称为基因文库。种类：基因组文库：含有一种生物所有的基因。部分基因文库：含有一种生物的一部分基因。(2)利用PCR技术扩增目的基因：原理：DNA分子半保留复制。场所：生物体外(PCR仪)。优点：操作简单、容易掌握、结果可靠、较短时间内大量扩增。发明家：美国科学家穆里斯。(3)通过化学方法直接人工合成目的基因：仪器：DNA合成仪。基因特点：比较小、脱氧核苷酸序列已知。2．构建基因表达载体(1)目的：使目的基因进入受体细胞并有效表达能稳定存在且遗传给后代。(2)组成：一个基因表达载体除了目的基因外还应包括启动子、终止子和标记基因等。 基因表达载体1为基因表达载体的构建过程图图2为基因表达载体模式图。请据图分析： 图2探讨：图1中的①是什么物质？切割目的基因和载体要选用同一种①吗？为什么？提示：限制性核酸内切酶。选用同一种①因为：选用同一种限制性核酸内切酶切割会产生相同的黏性末端可以在DNA连接酶的作用下将切割的目的基因和载体连接起来。探讨：图1中②是什么物质？试探讨用②连接目的基因和载体DNA时产生几种可能的连接方式？哪一种是符合要求的连接方式。提示：DNA连接酶。可能有3种连接方式即目的基因和目的基因相连、载体DNA和载体DNA相连、目的基因和载体DNA相连。其中符合要求的是目的基因和载体DNA相连形成的重组DNA分子。探讨：图2中的抗生素抗性基因属于什么基因？能否将目的基因插入该基因中？为什么？提示：标记基因。不能。标记基因用于鉴定受体细胞是否成功导入目的基因以便将含目的基因的细胞筛选出来若有目的基因插入则标记基因被破坏无法进一步筛选。 1．获取目的基因(1)来源。目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出2)具体方法。从已有的物种中分离：从基因文库中提取目的基因。化学合成法：对于比较小核苷酸序列已知的目的基因一般用人工合成的方法。如已知氨基酸序列合成DNA。 ③反转录法：它是以目的基因的mRNA为模板合成碱基互补的单链DNA然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA。 ④利用PCR技术扩增目的基因。的含义：一项在生物体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或DNA序列b．目的：短时间内大量扩增目的基因或DNA序列。原理：DNA分子半保留复制。特点：操作简单、易掌握、结果可靠能在短时间内大量复制目的基因或DNA序列。步骤：第一步向离心管加入模板、原料、引物及聚合酶。第二步加热至94 ℃双链DNA解旋为单链DNA。第三步冷却至55 ℃引物与两条单链DNA上的特定部位相互配对。第四步加热至72 ℃热稳定DNA聚合酶(聚合酶)从引物起始进行互补链的合成。如此重复循环多次。特点：指数形式扩增。2．PCR技术扩增目的基因与DNA复制的比较技术 DNA复制 相同点原则碱基互补配对原料四种脱氧核苷酸 条件 模板、ATP、酶 不同点 解旋方式 DNA在高温下变性解旋解旋酶催化 场所 体外复制细胞核内 酶 热稳定的DNA聚合酶(聚合酶) 细胞内含有的聚合酶 结果在短时间内形成大量的DNA片段形成整个DNA分子特别提醒]提取目的基因的三种方法的应用情况(1)如果不知道目的基因的核苷酸序列可以通过构建基因文库的方法即通过用受体菌储存并扩增目的基因后从基因文库中去获取目的基因。(2)如果知道目的基因的核苷酸序列，而且基因比较小，可以通过DNA合成仪利用化学方法人工合成。(3)如果知道扩增目的基因及两端的核苷酸序列而且基因又比较大则可以通过PCR技术扩增目的基因。3．构建基因表达载体(1)基因表达载体结构。 (2)分析。启动子：一段有特殊结构的DNA片段位于目的基因上游的一段核苷酸序列是RNA聚合酶识别和结合的部位。目的基因：编码DNA片段位于目的基因的尾端作用是使转录在所需要的地方停止。标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因等其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(或目的基因是否导入成功)。(2)基因表达载体的功能。将目的基因导入受体细胞并使之有效表达。(3)基因表达载体的构建步骤。用同一种限制酶切割目的基因和质粒使其产生相同末端。将切下的目的基因片段与切开的质粒混合再加入适量DNA连接酶使目的基因插入质粒的切口处DNA分子(重组质粒)。特别提醒]启动子和终止子、起始密码子与终止密码子的区别(1)启动子和终止子都在DNA上在遗传信息转录时起作