第01章：临床生化检验参考方法.pdf

临床生化检验参考方法 建立的工作进展 张天娇 卫生部临床检验中心 工作背景 检验结果的准确性和可比性已受到广泛的重视， 提高和保证检验结果的准确性和可比性的有效手 段是开展量值溯源工作，而检验量值溯源的基础 是参考系统。 临床检验参考系统包括参考方法、参考物质和参 考实验室，其中参考方法是关键，参考物质由参 考方法定值，参考实验室是运行参考方法的实验 室。 工作背景 国家“十一五”科技支撑计划资助项目 （2007BAI05B09 ） 国家863计划资助项目 (2006AA020909) 工作背景  检验项目 1、代谢物类：胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素 2、离子类：钠、钾、氯、钙、镁 3、酶学类：丙氨酸氨基转移酶、-谷氨酰转移酶、天门冬氨酸 氨基转移酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶 4、非肽激素类：T3、T4、孕酮、雌二醇、皮质醇 5、脂蛋白类：高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇 （共约24项） 同位素稀释/色谱/质谱联用技术  目前国际公认的可准确测定小分子化合物的方法 可用于一级参考测量过程的测量原理  同位素内标 “理想”的内标物，与待测物没有结构上的差异  色谱/质谱联用测定系统 高特异性 高灵敏性 色谱/质谱联用测定系统 气相色谱/质谱联用系统 Agilent 6890 N /5975 MSD 色谱/质谱联用测定系统 液相色谱/ 串联质谱系统 高效液相色谱仪Agilent 1200和串联三重四极杆质谱仪API 4000 血清孕酮 方法 13 （1）以[3,4- C ]孕酮为内标，用正己烷提取血清 2 （2）以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理 （3）用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化 （4）用气相色谱分离衍生产物，质谱选择离子监测模 式检测孕酮与内标的特定碎片离子 （5）包括法定量 血清孕酮 CH CH 3 3 C O C O HFBA O O F C C O 7 3 ( Ⅰ) ( Ⅱ) ( Ⅰ) 孕酮(孕甾－4烯-3，20－二酮) ( Ⅱ) 孕酮衍生产物 （孕甾-3，5-二烯-20-酮-3-七氟丁酸酯） 图：孕酮和内标的衍生化 血清孕酮 1. 孕酮 2.内标 图3同位素稀释/气相色谱/质谱法测定血清孕酮 （A）和内标 （B）色谱图 血清孕酮 方法学评价 （1）精密度： 血清孕酮测定的总变异系数为0.69%～2.12% （2 ）回收率： 平均分析回收率为98.3%～100.1%。 （3 ）参考物质分析: 分析血清孕酮标准物质ERM-DA347，测定结 果 与靶值得偏差小于1.5%