AFLP分析中多态性扩增产物的回收克隆及鉴定-遗传.PDFVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)20(4):1一41998 ．遗 下专 快 报 · AFLP分析中多态性扩增产物的回收、克隆及鉴定① 李传友② 伏健民 金德敏 翁曼丽 王 斌③ 中（国科学院遗传研究所、北京 100101) 摘 要 本研究在摸索和优化了水稻AFLP分析体系的基础上，发展了多态性AFLP产物的高效克隆方 法。特异AFLP扩增产物直接从变性聚丙烯酞胺凝胶上分离纯化，再经过一至二轮PCR扩增，即可高效 地克隆于pGEM＠-Teasyvector系统中。本实验利用该方法成功地克隆了水稻温敏核不育等位突变系 5460S和5460F间的4个多态性AFLP产物，Southernbloting分析证明其中3个产物在水稻基因组中 为单拷贝序列，另一个为低拷贝序列。AFLP技术强有力的多态性检出能力再结合多态性扩增产物的高 效克隆方法，为寻找与 目标基因紧密连锁的分子标记提供了有力工具。 关键词 水稻，AFLP，分子标记 中图分类号 Q943 Recovery,CloningandIdentificationofPolymorphicAFLPProducts LIChuanyou FUJianmin JINDemin WENGManliWANGBin (InstituteofGenetics,ChineseAcademyofSciences,Beijing100101) Abstracts AnefficientmethodforcloningDNAfragmentfromdenaturingpolyacrylamidegelswasde velopedtoallowtheisolationofspecificbandsobtainedfromamplifiedfragmentlengthpolymorphism (AFLP)products.Afterisolationandpurificationfromthethindenaturingpolyacrylamidegels,specific AFLPproductsweresuccessfullyclonedafteroneortworoundsofPCRreamplification.Usingthismeth- od4polymorphicAFLPproductsbetweenapairofricealleliclinesdiffernigforthermo-sensitivegenic malesterile(TGMS)genewereclonedanditwasconfirmedthat3oftheAFLPproductsrepresentedsin glecopysequencesandtheother1representedlowcopysequenceinricegenome. KeywordsRice,Amplifiedfragmentlengthpolymorphism(AFLP),Molecularmarker DNA指纹技术(D（NAfingerprintingtechnique）在遗传连锁图的绘制及鉴定与目标基因连锁的分子标记中起 着重要的作用。从原理上目前已发展起来的DNA指纹技术主要分为两类：即传统的以Southern杂交为基础的 RFLP技术和以聚合酶链式反应P（CR）为基础的一系列分子标记技术，其中以RAPD技术为代表，在应用过程中 RFLP和RAPD技术表现出各自的优缺点。RFLP技术结果稳定，重复性好 但其多态性检出率很低；RAPD技 术简便易行，多态性检出率高，但对实验条件很敏感，实验结果的重复性和可靠性较差。AFLP是新近发展起来的 一项DNA指纹技术c1,2)，它从原理上结合了RFLP和RAPD的优点，通过对基因组DNA的限制性酶切片段进 行选择性扩增而揭示多态性。在AFLP反应中，酶切后的DNA片段被连上通用的接头A（dapter顺序作为PCR ①本研究是863高技术项目(B（H-01-02-02-02）研究内容的一部分。 ②李传友，男，28岁 博士研究生，专业方向为植物分子生物学。 ③通讯联系人。 2 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1998 20卷 扩增的模板，这样接