快速检测心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫微流体测试卡.pdfVIP

第 4_4卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第4期 2016年 4月 ChineseJournal ofAnalyticalChemistry 633～639 DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．160045 快速检测心型脂肪酸结合蛋 白的荧光免疫微流体测试卡 孟凡达 2 霍卫松 贺美琳 2 李 昊 廉 洁 石西增4 高云华 。(中国科学院理化技术研究所光化学转换和功能材料重点实验室，北京 100190) (中国科学院大学，北京 100049) (中国人民公安大学刑事科学技术系，北京 100038) (东莞博识生物科技有限公司，东莞 523808) 摘 要 研制出一种以时间分辨荧光微球作为标记 ，自驱动快速检测H-FABP的荧光免疫微流体测试卡。利 用激光切割法在双面胶上简便、快速地切割出所设计的微通道结构 ，并采用激光切割法制作出聚甲基丙烯酸 甲酯(PMMA)测试卡底板及上盖。使用提拉涂膜的方法在PMMA底板表面修饰马来酸酐官能团，有效地解 决了捕获抗体在PMMA表面的固定问题。使用等离子体处理测试卡上盖改善其亲水性，使液体能够在微通 道内自行流动。使用此测试卡可 以实现对心型脂肪酸结合蛋 白(H—FABP)的快速检测 ，线性检测范围为 0．5—100ng／mL，检出限为0．1ng／mL(S／N=3)，检测时间少于 10min，批内相对标准偏差(RSD)10％，批间 RSD15％。本方法具有灵敏度高、检测时间短、结果准确等优点，可以满足临床检测的需求，具有良好的应用 前景。 关键词 心型脂肪酸结合蛋白；检测；微流体；时间分辨荧光 1 引 言 微流控技术的发展为蛋白的快速及其高通量的检测提供了一个新的思路及平台¨曲J，并且大大降 低了检测成本。与传统的分析方法相比，微流体检测具有高效、快速、试剂消耗少、自动化等优点。目 前，用于制作微通道的材料主要有单晶硅、无定形硅、玻璃、石英、高分子聚合物，如环氧树脂、聚脲、聚 氨、聚苯乙烯 (PS)和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)以及聚二甲基硅氧烷 (PDMS)等 。高分子聚合物 相比于无机材料具有种类多、价格低廉、加工方法多种多样以及容易实现批量生产等优势，已成为制作 微流体芯片的首选材料。其中PMMA因其出色的光学性能、良好的加工特性、生物亲和性好等优点而 被广泛用于体外诊断领域 ¨。但是PMMA仍旧存在着表面难 以修饰蛋 白、表面疏水性强、背景荧光相 对较高等缺点，因而限制了其在微流体器件制作中的应用。此外，简单、高精度微通道的加工制作仍是 微流体检测技术的主要难点之一。 心脏型脂肪酸结合蛋 白(Heart—typefattyacidbindingprotein，H—FABP)是一种低分子量蛋 白质 (相 对分子量为 15000) ，主要担负结合脂肪酸并调节其细胞内代谢的功能。作为心肌细胞质特异性蛋 白，H．FABP能够在心肌损伤的早期释放入血液，因此可作为心肌损伤的一种新的标志物，用于急性心 肌梗塞 (Acutemyocardialinfarction，AMI)的早期诊断。目前，H—FABP的检测方法主要有酶联免疫法、侧 向层析法、免疫比浊法等_1 J，但它们或存在着操作费时繁琐，或存在着灵敏度、准确性差，或过分依赖 于大型检测仪器等缺点，从而限制了其在即时检测 (Pointcareoftest，POCT)中的应用。 时间分辨荧光免疫分析法 (Time—resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)是在传统荧光免疫分析基础 上，利用稀土离子的螯合物作为标记物的一种新型的非放射性免疫分析技术 卜 。由于该螯合物的荧 光具有长寿命的特点，利用时间分辨的方法可以有效地排除生物样品中某些蛋 白荧光以及基底材料背 景荧光的干扰，从而大大地提高检测的灵敏度。 本研究将微流体技术与TRFIA技术相结合，使用激光打印技术切割PMMA，并且在双面胶上快速 打印出所需要的微通道，使用等离子技术改善PMMA的表面性质，制作出一种易