茄子子叶原生质体再生可育植株.PDFVIP

遗传学报，15(3):181-184,1988 洲贻toGeneticaSinica 茄子子叶原生质体再生可育植株 李耿光 张兰英 （中国科学院华南植物研究所，广州） 将茄子子叶原生质体放在0.75%纤维素酶R-10,0.2％半纤维素酶Rhozyme和0.2Vc果 一’胶酶溶液中分离。原生质体在培养基中诱导出小愈伤组织。愈伤组织在 ms十219/1KT+ fl,005mg1lNAA十2%蔗塘的固体培养基中，一个月后分化出芽。芽生长至3-4厘米高，转 接在MS+0.1m/g1 IAA十1％活性炭十201o蔗糖的培养基上，一个星期后可长出根，继而形成 ＿完整植株。随后移栽至灭菌的混合土壤中长到开花结果。 关键词：茄子，子叶原生质体，植株再生 植物原生质体的全能性在植物形态发生和作物改良的研究中提供了一个很有生命力 哟重要途径。近十年来，在这方面开展了大量工作，许多植物的原生质体诱导发生了分 裂、增殖，最后分化出完整植株。最近着重对在经济上有重要价值的植物进行了原生质体 植株再生的研究。 茄属 (Solanum）植物的经济价值是比较大的，从该属植物中已分离出原生质体并发 育成植物的有：马铃薯[2-4,7,10-121、龙葵L8,131、巴西茄L61以及茄子51〔91。然而，采用茄子子叶原 生质体培养成植株，至今未见报道。本文首次报道茄子子叶原生质体培养成植株并已结 果，为改良茄子的品质、探索原生质体融合和细胞遗传操作等提供了先决条件。 材 料 与 方 法 实验采用广州郊区农家品种远景茄 (SolanummelongenaL.CV.Yuanjing)，由广 州市沙河长碰村提供。种子用75外酒精浸渍数秒钟后再在0.1外升汞中泡8分钟，然后 用灭菌的重蒸水冲洗5次。将消毒好的种子接种在1/2SH 大量元素十10lo蔗糖的琼脂 培养基上，培养在 （1)25士20C,1800lux和每天光照8小时；(2)2，士20C,4000lux和 每天光照16小时的条件下。5天后大部分种子开始萌动，培养到两星期左右，具子叶的 无菌小苗可长至2-3厘米高。此时刚充分展开的子叶可作为分离原生质体的材料。 配制酶液，包含有1.5务纤维素酶 (OnozukaR-10),0.4多半纤维素酶 (Hemicellu-- laseRhozyme),0.4多果胶酶 (Pectinase)，3mMCaH4(PO4)Z·H2O和0.55M 山梨塘 醇，调整PH至5.7。将酶液与原生质体培养基L97按1:1比例混合。 事先分别用0.45与 00.2icm微孔器过滤灭菌。在无菌条件下将子叶取出，小心地切成宽为0.3--0.5毫米的细 条，放入以上的混合酶液中，静置黑暗培养于25℃中，5-6小时后分离出原生质体。分 离出的原生质体用孔径61,um不锈钢筛过滤，以除掉碎片和未消化的材料。将原生质体 本文于1987年3月24日收到。 182 遗 传 学 报 15卷－ 悬浮液通过离心 5（00-1000rpm3分钟），并用0.55M山梨糖醇与3mMCaH4(PO4)· H2O缓冲液再悬浮洗涤3次。随后原生质体在培养基A中稀释，其密度为1041毫升，用血一 球计数板计算产量。将约40川原生质体悬浮液滴于塑料培养皿上，在26℃中黑暗培养。 培养15天左右，通过加人约40川0.35M渗透压剂的培养基A和培养25天以后加人 0.25M渗透压剂的培养基A，逐步降低培养基的渗透压。 两个月后，当形成直径约1-1.，毫米的细胞团时，可将其转入琼脂培养基 0（.6多） 上：(1)MSS-1mg八 NAA+2% 蔗糖 (Ci培养基）；(2)MS+2mg/lKT+0.05mg八 NAA-+外蔗糖 (C2培养基），作进一步诱导愈伤组织。随后为了探索愈伤组织的分化，以 MS为基本培养基，配制了不同植物生长调节物质的组合和配比进行实验。原生质体愈伤， 组织的进一步诱导及其器官分化都培养在25士20C，约2000lux光照16小时的条件下。 愈伤组织发生器官分化后，待芽长到3-4厘米高时，将其从愈伤组织上分离开来，并 转入生根的琼脂培养基上 (〔1)MS+O.lmg/l