大豆过敏原的生物去除.pdfVIP

摘 要 摘 要 本文旨在对大豆蛋白主要过敏原 Gly m Bd 60K 即 β-伴大豆球蛋白的 α亚基进行降 解，以酪蛋白和大豆分离蛋白为底物，经 SDS电泳验证，分离筛选出能够降解 Gly m Bd 60K 的微生物，并对其降解条件进行优化，降解效果进行免疫验证，然后对降 解后的大豆分离蛋白的功能特性进行研究。同时对筛选出的菌株进行菌种鉴定及摇瓶水 平的发酵优化。本论文主要结论如下： (1) 经酪蛋白初筛及大豆分离蛋白复筛并进行 SDS电泳验证，从预制备豆制 品的大豆粉浆中筛选到一株能够降解 Gly m Bd 60K 的芽孢杆菌 Bacillus sp.，命名为 Bacillus sp. BBE201108，菌种保藏号为 CCTCC M 2012165，同时此菌也能够降解 β-伴 大豆球蛋白的另一潜在致敏原 β-伴大豆球蛋白的 β亚基。 (2) 对大豆分离蛋白的脱敏条件和Bacillus sp. BBE201108 蛋白酶的部分酶学性质进 行了初步研究。结果发现，Bacillus sp. BBE201108 蛋白酶最适作用温度为 50℃，最适 作用 pH 值为 8.0，每毫升 1%大豆分离蛋白溶液添加 30 U 的 Bacillus sp. BBE201108 蛋 白酶降解效果最佳。制备的抗大豆分离蛋白兔多克隆抗体能够识别Gly m Bd 60K 和 β- 伴大豆球蛋白的 β亚基，对 Gly m Bd 60K 识别灵敏度较高， 在其浓度为 500 pg 时也能 够识别出来。按照优化后的脱敏条件对大豆分离蛋白进行脱敏，并对脱敏后的大豆分离 蛋白进行 SDS电泳验证和免疫学验证，研究结果发现，Gly m Bd 60K 被充分降 解，失去致敏性；β-伴大豆球蛋白的 β亚基也因含量降低而失去致敏性。 (3) 对脱敏大豆分离蛋白的部分功能特性进行了研究，研究结果显示，对照未经处 理的大豆分离蛋白，脱敏大豆分离蛋白的乳化性和起泡性都有所下降，但是乳化稳定性、 起泡稳定性和凝胶性都有所提高。 (4) 对筛选得到的野生菌 Bacillus sp. BBE201108 进行了摇瓶水平的发酵优化。通过 单因素碳源、氮源、无机盐及正交实验确定了 Bacillus sp. BBE201108 的最佳培养基配 方为：葡萄糖 2% 、大豆蛋白胨2% 、酵母粉 1%、Na HPO ·12H O 0.4%、KH PO 0.06% 。 2 4 2 2 4 同时还研究了起始pH 值、种龄、接种量、装液量、培养温度对菌株 Bacillus sp. BBE201108 产酶的影响。在最优发酵条件下，菌株 Bacillus sp. BBE201108 发酵 36 h 时酶活达到最 高，最高可达 292.74 U/mL 。 关键词：Bacillus sp. BBE201108；大豆过敏原；Gly m Bd 60K ；功能特性；发酵优 化 I Abstract Abstract Based on the purpose of degradation of α-subunit of β-conglycinin (Gly m Bd 60K), casein plate selecting, soybean isolate protein re-screening and SDSverification was used for screening certain microorganism. And the production of protease by the microorganism, the ef