DB213002013牛羊组织中β-受体激动剂残留检测超高效液相色谱.DOC

DB 21/3004—2013 目 次 前言 Ⅱ 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 测定方法 1 3.1 方法原理 1 3.2 试剂 1 3.3 仪器和设备 2 3.4 测定步骤 2 3.5 结果计算和表述 4 4 检测方法灵敏度、准确度和精密度 5 4.1 灵敏度 5 4.2 准确度 5 4.3 精密度 5 5 附录A（资料性附录）β-受体激动剂特征离子质量色谱图前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009。 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。 本标准由发布。 本标准参照农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法。 本标准起草单位：。 本标准起草人：刘敬先 徐丽佳 苗翠 刘笑 王丽娜 李楠 李廷。 范围 本标准规定了牛肉羊肉中特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗残留检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于牛肉羊肉中特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗单个或混合物残留量的检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法农业部1025号公告-18-2008 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法测定方法 方法原理 试料中的β-受体激动剂残留经乙酸铵提取和β-盐酸葡萄糖醛苷酶的酶解后，用高氯酸沉淀提取液中蛋白和部分杂质，调pH值过混合阳离子固相萃取柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法测定。 试剂 以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。 标准品：特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗，纯度均≥95.0 %。 同位素内标：克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3，纯度均≥92.0 %。 甲醇：色谱纯（Fisher Scientific）。 乙腈：色谱纯（Fisher Scientific）。 甲酸：色谱纯，纯度≥99.0%。 甲酸水溶液（0.2 %）：取1 mL甲酸至500 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 乙酸铵：分析纯，含量≥98.0%。 乙酸铵缓冲液（0.2 mol/L）：称取15.4 g乙酸铵，溶解于1000 mL水中，用适量乙酸调pH值至4.6。 高氯酸：分析纯，含量为70 %~72 %。 氢氧化钠：分析纯，含量≥96.0% 氢氧化钠溶液（10 mol/L）：称取40 g氢氧化钠到200 mL烧杯中，加入100 mL水后，摇匀放冷。 氨水：分析纯，含（NH3）量为25~28%。 氨化甲醇溶液（5%）：取5 mL氨水至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 β–盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶（β-Glucuronidase/aryl sulfatase）。标准储备液（100 μg/mL）：准确称取适量的特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗对照品，用甲醇分别配制成100 μg/mL的标准储备液，℃冰箱中保存，有效期为3个月。 混合标准中间液（1 μg/mL）：分别准确吸取1.0 mL的特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗标准储备液至100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，℃冰箱中保存，有效期为1个月。 同位素内标储备液（100 μg/mL）：分别取三种同位素内标，各自用甲醇配成浓度约为100 μg/mL的储备液℃冰箱中保存，有效期为3个月。 混合同位素内标工作液（100 μg/L）：将上述三种同位素内标储备液，用0.2%甲酸水溶液稀释成约100 μg/L的混合工作液℃冰箱中保存，有效期为1个月。 混合标准工作液（10 μg/L）：准确吸取1.0 mL的混合标准中间液10.0 mL混合同位素内标工作液至100 mL容量瓶中，用0.2%甲酸水溶液稀释至刻度，℃冰箱中保存，有效期为1周。 仪器和设备 超高效液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源）。 涡旋混合器。 冷冻离心机。 恒温定时振荡器。 旋转蒸发仪。 固相萃取装置。 MCX固相萃取柱β-agonists)：60 mg/3 mL。氮吹仪。 测定步骤 样品处理 试料的制备包括：——取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎10000 r/min的转速均质。 ——上述制备过的牛肉羊肉样品，于-20 ℃以下贮存。——取均质的供试料品，作为供试试样。 ——取均质的空