siRNA沉默socs3对红系发育的影响.pdfVIP

PaperS 麓施豢巍黝磁猫甄赫瀚赢瓿瀛藤赫黝瀛缀藤黝巍戮赫～。ReSearch PI目13豢藉毛脚枷 www．pibb．ac．cn siIⅢA沉默socs3对红系发育的影响木 刘雨潇 吉 蕾袁红丰 陈琳薛郡管兆轩 南 雪 白慈贤王韫芳岳文裴雪涛” (军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室，北京100850) 摘要 为了研究细胞因子信号转导分子3(suppressorofcytokine 毒siRNA干涉载体，并转染人红白血病细胞株K562．根据绿色荧光蛋白的表达进行流式分选后，获得了高表达慢病毒干涉 检测K562细胞向红系分化比例变化，免疫荧光染色检测细胞表面抗原的变化，RT．PcR检测造血相关基因的变化．结果发 表达进行干涉或沉默将在规模化的红细胞诱导研究中发挥重要作用． 关键词siRNA，基因沉默，socs．3，慢病毒，K562细胞 学科分类号Q28，Ib4 红细胞输注是目前临床输血的常用手段，可预 主要通过三种方式进行：利用和sTAT相似的sH2 防发热性非溶血性输血反应，尤其适用于需反复输 结构域，竞争结合细胞因子受体胞质区的磷酸化位 血的血液病患者，骨髓移植及既往曾有过输血反应 的患者【l，21．然而目前红细胞来源紧张、数量及扩 合，竞争性地抑制JAK与底物的结合；或通过C 增能力有限及污染等问题给其临床使用的安全性和 端的SOCS盒与伸蛋白复合体结合，将SOCS一3结 广泛性带来了极大挑战．因此人们期望更为安全、 合的信号蛋白通过泛素途径降解，从而阻断细胞因 有效和经济的血细胞资源．随着干细胞研究及其相 子的信号传递．因此SOCS一3在胚胎发育、肿瘤生 关领域的生物学技术的快速发展，以胚胎干细胞或 成等方面发挥着重要的调控作用．对小鼠胚胎发育 造血干细胞为启动细胞的造血干细胞工程为临床输 的研究表明，过表达或敲除该基因的小鼠均在胚胎 血和干细胞的移植带来了新希望．与此同时深入研 期发生死亡．75％的JsD∞．3转基因小鼠的胚胎肝 究红细胞生成机制、建立高效的红系诱导分化体系 脏中完全无红细胞生成，而SOCS．3^小鼠则会出 便具有了非常重要的意义【3】． 现红细胞增多症【q． of 为此我们构建了慢病毒RNA干涉载体 细胞因子信号转导抑制因子．3(suppressor cytokitlesi印als，SOCS一3)最早发现于1997年，它 在染色体上的位置为17q25-3，CDS区由675个连 续核苷酸组成，编码225个氨基酸．SOCS．3和其 家族其他成员具有相似的蛋白质结构，主要由链中 部的SH2结构域、N区和C区的SOCS盒组 成【4，5】．SOCS．3的主要生理功能是抑制细胞因子的 培育专项(Z0005190043331)资助项目． 信号转导．细胞因子可诱导sOcs一3基因的表达，”通讯联系人． Tcl：01 而SOCS一3基因的表达产物又可特异性地抑制细胞 OE—m枷：pc奴t@nic．bIni．∞朋 收稿日期：2007．11．26，接受日期：2007．12-28 因子的信号传导．SOCS．3的这种负反馈调节作用 2∞8；35∽ 刘雨潇等：如lNA沉默socs3对红系发育的影响