光学显微镜的分类.PPT

第三章： 普通光学显微镜发展历史与主要技术参数 一、显微镜的发展简史 普通光学显微镜： 人的眼睛不能直接观察到比0.1mm更小的物体或物质的结构细节。在显微镜发明出来之前，人类关于周围世界的观念局限在用肉眼，或者靠手持透镜帮助肉眼所看到的东西。人要想看得到更小的物质结构，就必须利用工具，这种工具就是显微镜。 很早以前，人们就知道某些光学装置能够“放大”物体。比如在《墨经》里面就记载了能放大物体的凹面镜。公元前一世纪，人们就已发现通过球形透明物体去观察微小物体时，可以使其放大成像。后来逐渐对球形玻璃表面能使物体放大成像的规律有了认识。至于凸透镜是什么时候发明的，可能已经无法考证。 凸透镜——有的时候人们把它称为“放大镜”——能够聚焦太阳光，也能让你看到放大后的物体，这是因为凸透镜能够把光线偏折，形成放大的虚像。单个凸透镜能够把物体放大几十倍，这远远不足以让我们看清某些物体的细节。 早在1590年，荷兰和意大利的眼镜制造者已经造出类似显微镜的放大仪器。1610年前后，意大利的伽利略和德国的开普勒在研究望远镜的同时，改变物镜和目镜之间的距离，得出合理的显微镜光路结构，当时的光学工匠遂纷纷从事显微镜的制造、推广和改进。 大约在16世纪末，荷兰的眼镜商詹森（Zaccharias Janssen）和他的儿子把几块镜片放进了一个圆筒中，结果发现通过圆筒看到附近的物体出奇的大，这就是现在的显微镜和望远镜的前身。 詹森制造的是第一台复合式显微镜。使用两个凸透镜，一个凸透镜把另外一个所成的像进一步放大，这就是复合式显微镜的基本原理。 1665年，英国科学家罗伯特·胡克用他的显微镜观察软木塞切片的时候，惊奇的发现其中存在着一个一个“单元”结构，胡克把它们称作“细胞”。 胡克的显微镜能够放大约140倍，其中加入粗动和微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台等，使得操作更加方便。这些部件经过不断改进，成为现代显微镜的基本组成部分。 荷兰人安东尼·冯·列文虎克（Anthony Von Leeuwenhoek ，1632-1723)制造的显微镜让人们大开眼界。 他制造的显微镜其实就是一片凸透镜，而不是复合式显微镜。不过，由于他的技艺精湛，磨制的单片显微镜的放大倍数将近270倍，超过了以往任何一种显微镜。 1684年前后，荷兰学者惠更斯设计并制造出结构简单而且效果较好的双透镜目镜—惠更斯目镜，至今仍然广泛地应用在各种普通显微镜上。 19世纪中叶，高质量消色差浸液物镜的出现，使显微镜观察微细结构的能力大为提高。 1827年阿米奇第一个采用了浸液物镜。 19世纪70年代，德国人阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。这些都促进了显微镜制造和显微观察技术的迅速发展，并为19世纪后半叶包括科赫、巴斯德等在内的生物学家和医学家发现细菌和微生物提供了有力的工具。 在接下来的两个世纪中，复合式显微镜得到了充分的完善。 现代普通显微镜 如果仅仅凭借光的直线传播和折射等原理，我们可以想象出任意放大倍数的显微镜。但是光的波动性质使得光学透镜的诸多弊端原形毕露，而且即使消除掉透镜形状的缺陷，任何光学仪器仍然无法完美的成像。原因很简单：普通光学显微镜已经达到了分辨率的极限。 光在通过显微镜的时候要发生衍射——简单的说，物体上的一个点在成像的时候不会是一个点，而是一个衍射光斑。如果两个衍射光斑靠得太近，我们就没法把它们分辨开来。显微镜的放大倍数再高也无济于事了。 放大物体的可见性的决定因素 1.分辨率：指显微镜在25厘米的明视距离处，能分辨出标本上相互接近的两点间的最小距离的能力。 对于使用可见光作为光源的显微镜，它的分辨率极限是0.2微米。任何小于0.2微米的结构都没法识别出来。 2.反差：指物体与背景之间的对比度。增大反差可使物体清晰可见 解决方法：a.对于无色样品，可以通过染色增强反差 b.利用特别设计的显微镜加强反差，如使用暗视野显微镜、相差显微镜、偏振光显微镜等复杂显微镜。 复杂光学显微镜： 在显微镜本身结构发展的同时，人们对于光学知识的不断积累，使得人们对显微镜的光学成像原理有了新的认识，并开始从新的角度来改进显微技术。 人们在显微观察技术上典型的创新有： 1850年出现了偏光显微术； 1893年出现了干涉显微术； 1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术，他为此在1953年获得了诺贝尔物理学奖。 古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组合，它以人眼作为接收器来观察放大的像。 随着摄影技术和感光胶片、硅晶片等记录存储技术的产生和发展，人们开始把这些技术应用到显微镜装置中，以感光胶片作为可以记录和存储的接收器，代替人眼的直接观察。 现代又普遍采用光电元件、电视摄像管和电荷耦合器等作为显微镜的接收器，配以微型电