新城疫病毒单感染及猪流感病毒与猪链球菌共感染差异蛋白组学分析.pdf

内容提要 本课题是应用基于双向电泳的蛋白质组学技术及 MALDI TOF/TOF 质谱检 测技术，分析不同禽源的新城疫病毒（NA-1 及 F48E9 株）体外感染原代鸡胚成 纤维细胞（CEF ）全蛋白变化情况。实验分为三组比较：比较新城疫病毒 NA-1 感染细胞前后全细胞蛋白；比较新城疫病毒 F48E9 感染细胞前后全细胞蛋白； 比较不同NA-1 及 F48E9 新城疫病毒感染细胞后全细胞蛋白。通过比较鉴定差异 表达的蛋白，分析差异蛋白的功能。进而选取其中两种蛋白进行功能分析，采用 构建真核表达质粒转染细胞的方法，研究蛋白过表达对细胞增殖的影响。首先用 NA-1 株病毒体外感染原代鸡胚成纤维细胞 12h、24h 、36h 观察细胞病变及间接 免疫荧光试验确定病毒感染细胞最佳时期，通过以上两种方法，确定病毒感染全 细胞蛋白提取时间为病毒感染细胞后 24h ，在这个时期，大部分（90% ）细胞已 经被病毒感染，但并没有死亡，是病毒感染研究的最佳时间。在确定时间点后， 扩大培养细胞，然后将病毒 NA-1 及 F48E9 感染鸡胚成纤维细胞 24h ，感染结束 后加入全细胞蛋白提取液