不同氧浓度对裸鼹鼠原代鼠星形胶质细胞增殖及生长状态的影响.pdfVIP

第33卷第3期 实验动物科学 V01．33No．3 2016 2016年6月 LABORATORYANIMALSCIENCE June 妒驴护抄驴啕 §研究报告§ 易、沪、扩、；2矿．、：2净蕊 不同氧浓度对裸鼹鼠原代鼠星形胶质细胞增殖及 生长状态的影响8 杨文静1 聂玉梅2 肖 邦1 林丽芳1 孙 伟1 汤 球1 赵善民1 程继帅1 丛 薇1 蔡丽萍1 崔淑芳1 (1，第二军医大学实验动物中心，上海200433)(2，黑龙江省哈尔滨市武警边防总队警犬基地，哈尔滨150078) 摘要：目的建立裸鼹鼠星形胶质细胞体外培养方法，观察不同氧浓度对裸鼹鼠星形胶质细胞增殖及生长状态的 影响，寻找最适宜体外裸鼹鼠细胞增殖和生长的氧浓度。方法 利用机械法辅以化学法分离新生裸鼹鼠脑内胶质 细胞，利用差速贴壁法进行星形胶质细胞纯化，通过设置3％、5％、10％以及20％等不同氧浓度环境，利用CCK8染 色法分析不同氧浓度下裸鼹鼠星形胶质细胞增殖速率，利用免疫细胞化学染色法观察不同氧浓度下裸鼹鼠细胞胞 体伸长突起的状况从而进一步判断不同氧浓度下裸鼹鼠星形胶质细胞生长状态。结果 利用机械及化学法分离 裸鼹鼠胶质细胞并结合差速贴壁法能够成功建立体外裸鼹鼠星形胶质细胞模型。不同氧浓度环境下裸鼹鼠生长 速率不同，随着氧浓度的升高，裸鼹鼠进入快速生长期所用的时间越短。氧浓度为20％时，裸鼹鼠星形胶质细胞较 小，突起少，状态不佳，但是10％以下的氧浓度环境中，裸鼹鼠能保持较多的细胞突起，状态较好。结论机械及化 学法相结合，合并差速贴壁法能够成功建立裸鼹鼠星形胶质细胞体外培养模型，10％氧浓度下既可以保证裸鼹鼠 星形胶质细胞适宜的生长速率又能保证其处于良好的生长状态。 关键词：裸鼹鼠；星形胶质细胞；增殖；生长状态 中图分类号：Q95—33文献标识码：A 文章编号：1006—6179(2016)03-0020-07 裸鼹鼠(Heterocephalusglaber)分布于非洲肯尼不可逆损伤甚至引起神经系统功能障碍。3o。而急 亚、埃塞俄比亚、索马里等地区，隶属于啮齿目 性分离的裸鼹鼠海马切片在低氧或者遭受营养剥夺 (rodentia)，寿命长达30年以上…，是小鼠寿命(4—时，神经细胞存活并未受到影响M1，暗藏于其中细 5年)的6倍。由于常年生活在黑暗的地下，裸鼹鼠 胞及分子学机制亟待被揭示。 视觉、听觉以及体感等方面的功能均出现了严重的 神经系统是人类生命活动的控制中枢，对神经 退化，但同时也获得了一些独特的功能：最具代表性 系统功能的深入研究无论对于探索一些疾病的产生 的就是对慢性低氧的耐受能力和抗氧化应激能力， 机制和治疗策略还是利用神经系统开展的应用性研 并且维持恒温能力。2。的丧失使其机体代谢率能够 究都将为改善人类生活质量奠定扎实的基础。星形 针对环境中氧含量做出适应性的变化，从而保证其 胶质细胞是脑内数量最多的一类细胞，它除了为神 重要脏器的功能。 经元提供支持作用，还能够监视神经纤维网络微环 研究发现当外界氧含量不足以维持机体细胞水 境中氧含量以及离子浓度的细微变化∞’10。。在经 平的能量产出以保证机体所需时，将会对哺乳动物 受低氧或缺血缺氧损伤时，星形胶质细胞具有较强 的生命产生巨大的威胁。耗氧量占机体总耗氧量 的耐受能力…’”o。裸鼹鼠作为一种天然耐受低氧 20％以上的脑组织几乎没有能量储存机制，对氧匮 的哺乳动物，其脑内星形胶质细胞能在长期低氧的 乏尤为敏感，数分钟的低氧或缺氧都会导致神经元 环境中维持正常的生理功能，其生物学机制的阐明 收稿日期：2016—05—05