云南红豆杉小孢子发生和雄配子发育的研究方法比较.pdfVIP

云南大学学报(自然科学版)。2008。30(3)：302—307 CN53—1045／NISSN0258—7971 ofYunnan J舢mal University 云南红豆杉小孢子发生和雄配子发育的研究方法比较’ 王兵益，苏建荣，张志钧 (巾嘲林业科学研究院资源昆虫研究所，云南昆明650224) 摘要：以云南红豆杉为实验材料，比较了石蜡切片法、洋红简易染色法和整体染色透明法研究小孢子发生 过程的效果，分析了用石蜡切片法及离体培养法研究雄配子体发育优缺点．在离体培养中，对比了不同的蔗糖 质量浓度、培养温度及染色方法对实验结果的影响，从而为针叶树种雄性生殖系统发育过程研究提供参考．结 果显示：整体透明染色法操作简单，能够反应小孢子发育过程中各个阶段的细胞结构，是用于小孢子发育过程 研究的比较理想的方法；对于雄配子体发育过程的研究，需要用石蜡切片法与离体培养法相结合，在离体培养 中，采用雄球花表面灭菌，自然散粉，低糖低温培养有利于防止污染，洋红染色法方便快捷，不需要特别的设备， 足离体培养时比较理想的染色方法． 关键词：云南红豆杉；小孢子发生；雄配子发育；研究方法 中图分类号：O944．4 文献标识码：A 文章编号：0258—7971(2008)03—0302—06 elL． 云南红豆杉(Taxus，，unnanensis Cheng 色[4“]，随后发展到用超薄切片、电镜观测[7，8]或 K．Fu)是分布于缅甸和不丹北部及中国西南地区离体培养、荧光染色【9，l01．但直到现在为止，由于 2f．因 的红豆杉属(Taxus)植物…，发表于1975年l 不同的研究者使用的研究方法不同，只分别看到了 为富含抗癌药物紫杉醇，云南红豆杉倍受关注，也 雄性生殖系统发育的某些方面，所以可能得出不同 正足因为其具有重要的药用价值，云南红豆杉自然 的结论，例如，雄配子形成过程tp各阶段的产物究 种群曾遭到严重破坏，其保护地位也不断攀升，分 竟是细胞，还足核，分裂产物是否相等，精子形成后 别于1986，1993年和1999年被列为云南省二级保 是否继续分裂等【5,9J．即使用_；{=H同的方法，由于方 护植物、林业部二级保护植物和国家一级保护植 法中的操作细节或部分条件的改变也可能改变实 物．红豆杉科植物起源古老，与罗汉松科 验的结果，例如，同样使用离体培养，DAPI染色， (Podocarpaceae)、粗榧科(Cephalotaxaceae)植物具 有共同的祖先，特殊的系统地位使其在科学研究中 vifolia)的雄配体发育所需的时间及某些细节存在 具有重要的价值． 较大的差异【9，10J，但由于实验条件的不一致，很难 同红豆杉属其它种相似，云南红豆杉小孢子发 判断这种差异是物种之间的差异还是由于实验本 生和雄配子体形成过程极其漫长，小孢子成熟时为 身造成的．因此，如何根据需要来选择恰当的研究 单核，传粉后还需要在漫长的萌发过程中进行3次 方法和实验条件是研究红豆杉雄性生殖系统的关 分裂，最后形成成熟雄配子体，并产生用于受精的 键步骤．本文以云南红豆杉为材料，比较了用不同 精子∽J．对于红豆杉属小孢子发生和雄配子发育 制片及染色方法研究小孢子发生的优、缺点，并且 过程的研究从19世纪就开始了l4|，早期的主要研 讨论了不同的培养及染色方法在雄配子体的发育 究方法是石蜡切片法，用苏木精或番红、固绿染 过程的区别． ·收稿日期：2008一03—20 拿大阿尔们塔大学益客基金会资助；中国林科院资源昆虫研究所所长基金资助(riri200703Z)． 作者简介：王兵益(1976一)