专利-复合菌种对木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵.docVIP

说 明 书 摘 要 本发明涉及一种木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵方法，其将Y5和CBS6054分别接种于含有木质纤维素稀酸水解液的发酵培养基中，进行原位脱毒乙醇发酵。该方法能高效代谢木质纤维素稀酸水解产物中的葡萄糖和木糖产乙醇并快速代谢糠醛和5-羟甲基糠醛，乙醇产率为0.44g/g，达到理论值的87.5%，并且不需要进行任何脱毒处理，设备要求简单，操作方便，成本低。 尊敬的杨老师，您好！请您查收贵方委托我方代理的名称为“复合菌种对木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵”的发明专利申请文件2008年9月10日的初稿。?? 说明，为保证专利申请工作顺利进行，有如下需要您注意的地方：????1.有关问题的补充点已在文件上用不同颜色字体标出，在此基础上补充即可。????2.请申请人仔细阅读文件内容，若申请人有修改意见，可直接在初稿上修改，但请务必使用“修订”模式，或使用word的“批注”，并将处理过的文档作为邮件的附件回复给我即可，我方将及时进行修改。????3.若申请人对文件内容有任何疑问，请联络：专利二部 张晶 010868权 利 要 求 书 1、一种酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）Y5，保藏号CGMCC No. 2660。 2、一种复合菌，其含有S. cerevisiae Y5和P. stipitisCBS6054。 3、如权利要求2所述的复合菌，其特征在于，以重量计每克复合菌中S. cerevisiae Y5与P. stipitisCBS6054的菌数比为？：？-？：？（请申请人补充一个优选地比例范围）。 4、如权利要求3所述的复合菌，其特征在于，以重量计每克复合菌中S. cerevisiae Y5与P. stipitisCBS6054的菌数比为？：？（请申请人补充一个最优选的比例）。 5、如权利要求2-4任一所述的复合菌在木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵中的应用。 6、一种木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵方法，其特征在于，将Y5和CBS6054分别接种于含有木质纤维素稀酸水解液的发酵培养基中，在？℃-？℃、？rpm-？rpm培养？- ？h。 7、如权利要求6所述的方法，其特征在于，Y5和CBS6054接种到发酵培养基后，在30℃、80rpm培养？h。 8、如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，按照每ml发酵培养基？cfu -？cfu的量接种Y5和CBS6054。 9、如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基是以酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、木质纤维素稀酸水解液？，在pH5.0-5.5，121(C下，灭菌20min后制得。 说 明 书 复合菌种对木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵 技术领域 本发明涉及一种木质纤维素水解产物的原位脱毒乙醇发酵方法，具体地说，是将一种能高效代谢木质纤维素稀酸水解液中的葡萄糖和木糖产乙醇并快速代谢抑制因子糠醛和5-羟甲基糠醛的复合菌，接种到含木质纤维素稀酸水解液的发酵培养基中进行原位脱毒乙醇发酵。 背景技术 在以木质纤维素为原料生产乙醇的研究开发领域中，木质纤维素稀酸水解被认为是最容易实现商业化的生产工艺，国内外在该领域进行了大量深入的研究。但到目前为止，国内外在稀酸水解木质纤维素生产燃料乙醇方面还存在着一些问题，其中主要的技术瓶颈之一是水解糖液的高效乙醇发酵，包括高效利用木糖产乙醇、耐/分解抑制剂的微生物菌种。 能够进行木糖乙醇发酵的天然菌种很少，目前研究较为深入的Pichia stipitis能发酵木糖且具有很高的乙醇产率，Lohmeier-Vogel等人研究发现，P. stipitis对木质纤维素稀酸水解产物中的糠醛、羟甲基糠醛和乙酸等抑制因子比较敏感。只有少数酵母菌能耐受木质纤维素稀酸水解产物中较高浓度的抑制因子，如Saccharomyces cerevisiae TMB 3400，S.cerevisiae TMB 3006，Coniochaeta ligniaria NRRL30616等，但是它们却不能代谢木糖产乙醇。水解产物中的抑制因子会影响微生物的生长和发酵能力，其中糠醛和5-羟甲基糠醛（5-HMF）是最为主要的抑制因子。发酵前通常要对水解液进行脱毒处理，这就需要添加处理设备，并要使脱毒设备与发酵工艺很好整合，因而提高了整个乙醇发酵工艺的复杂性并提高了生产的成本。 为了对木质纤维素稀酸水解产物进行原位脱毒（即该发酵菌种在进行乙醇发酵的同时能高效代谢发酵液中毒性物质，不需进行任何脱毒预处理乙醇发酵就能正常进行的发酵过程）及葡萄糖和木糖的乙醇发酵，本发明研究人员利用一种能高效代谢葡萄糖产乙醇并高效代谢抑制剂，但不能代谢木糖产乙醇的酿