实验七特定产物工业生产菌种发酵及应用性质研究.docVIP

本科学生综合性实验报告 学院 生命科学学院 专业、班级 实验课程名称 发酵工程学 教师及职称 开课学期 至 学年 学期 填报时间 年 月 日 云南师范大学教务处编印 实验序号 七 实验名称 特定产物工业生产菌种发酵及应用性质研究 实验时间 2011.11.18~2011.12.11 实验室 基础生物学实验室2 1．实验目的 掌握菌种选育、菌种发酵条件的优化和微生物酶制剂酶活测定的基本方法； 了解酶学性质的研究. 了解影响果胶酶对果汁澄清效果的各种因素 2． 实验原理、实验流程或装置示意图 （1） b.果胶酶：是指能分解果胶质的多种酶的总称，广泛存在于高等植物和微生物中。 c.产生果胶酶的微生物：细菌、放线菌、酵母和霉菌，但目前商品果胶酶多数来自霉菌。 d.果胶酶的应用：主要是用于果胶的分解，在水果加工、葡萄酒生产、麻类脱胶和饲料等方面有着广泛的应用。 (2)、果胶酶的酶活测定方法 a.粘度降低法：利用粘度计测量在一定温度、酶浓度和一定反应时间内，标准果胶溶液的粘度降低值。 b.脱胶作用时间法：以脱胶作用的时间来测定果胶酶的酶活力。 c.次亚碘酸法：用滴定法定量测定半乳糖醛酸的生成量，以表示果胶酶的活力。 d.还原糖法（DNS法）：测定在一定温度、酶浓度和一定反应时间内，水解果胶产生的还原糖的量。 DNS法原理： 根据果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，后者是一种还原糖，与3，5 -二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。 (3)、微生物发酵生产特定产物受培养基成分、培养条件和附加条件等的制约 培养基成分：C源、N源、无机盐、水和生长因子 培养条件：温度、pH、溶解氧等 附加条件：诱导物、表面活性剂等 (4)、酶催化反应的进行受多种因素的影响 底物浓度 酶浓度 温度 pH 激活剂 抑制剂 (5).正交试验设计的基本原理 正交实验法就是利用排列整齐的表 -正交表来对试验进行整体设计、综合比较、统计分析，实现通过少数的实验次数找到较好的生产条件，以达到最高生产工艺效果。正交表能够在因素变化范围内均衡抽样，使每次试验都具有较强的代表性，由于正交表具备均衡分散的特点，保证了全面实验的某些要求，这些试验往往能够较好或更好的达到实验的目的。正交实验设计包括两部分内容：第一，是怎样安排实验；第二，是怎样分析实验结果。酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受多种因素的影响，如：底物浓度、酶浓度、溶液的pH值和离子浓度、温度、抑制剂和激活剂等都能影响催化反应的速度。通常是在其他因素恒定的条件下，通过对某因素在一系列变化条件下的酶活性测定，求得该因素对酶活力的影响，这是单因素的简单比较法。 ⑴ 基本培养基: 果胶1% ，磷酸氢二钠0.5%，蛋白胨1%，pH4.5，琼脂 2.0%。 ⑵分离培养基 果胶0.5%，磷酸氢二钠0.5%，琼脂2.0%，pH4.5 （3）发酵培养基 果胶1% ，磷酸氢二钠0.5%，蛋白胨1%，pH4.5。 2、黑曲霉Asp-2固体发酵培养基 a.菌种斜面培养基（查氏培养基） NaNO3 0.2% K2HPO4 0.1% KCl 0.05% MgSO4 0.05% FeSO4 0.001% 蔗糖 3% 琼脂 2.5% 自然pH b.种子培养基 麸皮 3.0% ，橘子粉 2.0% ，硫酸铵0.5%, 葡萄糖 1% ，KH2PO4 0.1% pH4.5 c.固体发酵培养基：5瓶 / 组 麸皮 10g，橘子粉 2.5g，(NH4)SO4 0.1g（0.8%干料计） 葡萄糖 0.125g（1%干料计），水 15ml （二）试剂 1、酶活测定使用试剂 a.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液：称取柠檬酸15.652g，柠檬酸钠7.5g，溶解定容至1000ml，用0.1M NaOH 或0.1M HCl 调节pH至3.0。（共配300