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2017-10-17 发布于湖北
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周期凋亡.pdf

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周期凋亡

2013‐4‐15 细胞周期与凋亡的流式实验方法和数据分析贝克曼库尔特生命科学部王莉静细胞周期检测与分析 1 2013‐4‐15 原理能对细胞周期进行细分并且准确量化的研究方法，流式细胞术目前来说是不可替代的技术。常用染料：PI、DAPI、7-AAD、Hoechst DRAQ5…… 样本制备 6 1. 单细胞悬液制备，浓度约10 / ml。 2. 固定：常用70%的冰酒精，将细胞悬液逐滴加入。 40C冰箱固定4小时上。 3. 染色： 488nm的激光下应用PI(碘化丙啶)，染液中同时加入Rnase和Triton。PI的推荐浓度是至 6 6 少20ug/10 个细胞。其最佳浓度为50ug/10 个细胞。在室温200C下避光孵育30分钟，3小时内上机分析。 4. 过滤后上样，防止堵塞管道。 2 2013‐4‐15 Protocol设定（画图） • X: SS Y: FS • X: PI Lin Y: PI • 单参：PI • 前向触发 Peak • 电压调至合适位置， • 将电压调至合适位 • 改图主要用于排除最好将整个周期图置，使所测细胞均粘连体调至中间，适合软可见件拟合排除粘连体细胞由于细胞制备的问题（特别是非悬浮细胞），常常造成细胞分散不均匀，从而造成大量的聚集体形成。当2,3个细胞聚集在一起时即使用过滤的方法也难以除去，往往容易影响结果的准确性。峰值（Peak，Hight）峰面积（Aria）峰宽（Width） 3 2013‐4‐15 排除粘连体细胞排除粘连体细胞 4 2013‐4‐15 分析方法软件拟合： • 鼠标点击要保存的文件名，Gate，通道，数据类型单参图，使菜单栏保持高亮。 • 将柱状图文件保存到指定位置。分析方法软件拟合： • 在MulitCycle里面打开刚才的HST文件，点击OK，软件自动分析