第五单元 基因工程载体.pdf

2008-1-28 15:20:35 PM 基因工程载体 基因工程载体 113 页 第 1 页 2008-1-28 15:20:38 PM 一、载体概论 n 因工程的目的和基本手段： 选用合适的载体把供体DNA(外源基因)运 载到相应的受体细胞内，从而复制、扩增出 大量的目的DNA分子或者转录、表达为相应 产物，所有这些都必须选择合适的载体。 n 载体（Vector ）： 能够通过基因重组技术携带、运载外源 因或者DNA片段到达受体细胞，完成克隆、 复制、表达的具有特定结构和功能的DNA分 子运载工具。 113 页 第 2 页 2008-1-28 15:20:42 PM 基因工程中所使用的载体可分类： n 克隆载体(cloning vector)： 克隆载体是指可以携带外源基因或DNA片段进入受体 细胞并使外源DNA大量扩增的复制单元，适用于复制扩 增外源DNA。 n 转录载体(transcription vector)： 转录载体是以DNA为模板、用RNA聚合酶Ⅱ合成RNA的 过程，多 用体外转录体系。 n 表达载体(expression vector): 表达载体是用于表达原核或真核细胞中某个特定 因所编码的蛋白质产物的载体，其克隆位点的上游含有 强启动子、下游含有转录终止序列，适用于表达某特定 蛋白质。 113 页 第 3 页 2008-1-28 15:20:45 PM 载体 vector n 克隆、表达的 本流程是： 克隆载体 转录载体 DNA DNA RNA 蛋白质 表达载体 原核载体 质粒(pBR322,pUC）噬菌体 （λ，M13 ） 真核载体：酵母、病毒载体等 113 页 第 4 页 2008-1-28 15:20:47 PM 二、克隆载体 目前使用的载体，按其特性可分为六类： ① 质粒(plasm id)； ② 噬菌体(bacterphage)； ③ 黏性质粒(cosmid)； ④ M13噬菌体(phage Ml3)； ⑤ 酵母(yeast)载体； ⑥ 真核细胞病毒载体(eukaryotic virus vector)。 前四类克隆载体用于原核细胞中； 酵母和病毒载体则属于真核细胞克隆或 表达载体。 113 页 第 5 页 2008-1-28 15:20:48 PM （一） 因工程中的克隆载体应具有特性 ① 具有复制子，在宿主细胞内可自主地复制， 并携带重组DNA分子一同扩增；可转移性。 ② 有单一限制性内切酶的酶切位点或多克隆位点 (multiple cloning site ，MCS)，MCS是人工合成 的一段含有多个不同的单一限制性内切酶切点的 DNA序列，它有利于外源基因插入该区域； ③ 有选择性遗传标记，如抗药 因、酶基因、 营养缺陷体及噬菌斑形成能力等，便于筛选 出阳性重组体； ④ 拷贝数高(10 200个／每个细胞)，易于分离； ⑤ 物安全性好。 113 页 第 6 页 2008-1-28 15:20:49 P