单克隆抗体技术摘要.pdfVIP

生物秀实验频道——生命科学实验中心 ！  /bio101/  单克隆抗体技术 单 克 隆 抗 体 技 术 （Monoclonal antibody technique） （ M o n o c l o n a l a n t i b o d y t e c h n i q u e ） 一、 原理  B 淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌 特异性抗体的能力。B 细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下 去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种 B 细胞与非分泌型的 骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞 是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的 B 淋巴细胞的能力， 将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、 单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。 制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核 苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的 B 细胞融合。采用 HAT 选择性培养基（培养 基中加次黄嘌呤 HyPoxanthine H，氨基喋呤 Aminoopterin A 及胸腺嘧啶核苷  Thymidine  T），在这种选择性培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤 磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸 腺嘧啶核苷而合成 DNA。而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成 DNA，这 一途径又被氨基喋呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡。融合的 杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤 合成 DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来。B  淋巴细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于二周内均死亡。 单克隆抗体与常规抗体相比有如下优点：①单一特异性，与一个抗原决定 簇反应；② 可重复性，能够提供完全一样的抗体制剂；③一经制出，可无限 量地供应；④生产单克隆抗体，不一定需要纯的抗原；⑤能查出混合物中存在 的用常规方法查不出的少量成分。 单克隆抗体与常规的血清抗体的性质比较，见表 10­1。 表 10­1  单克隆抗体与常规抗血清的性质比较 性 质 常规血清抗体 单克隆抗体 抗体含量 少  μg/ml  多  mg/ml  无关的 Ig  多 少或几乎无 ·  1  · 其它血清蛋白 有 少，培养物上清常有  10％ 胎牛血清 生物秀论坛——资源共享、学术交流、互助社区  /bbs/  生物秀实验频道——生命科学实验中心 ！  /bio101/  Ag­Ab结合 免疫原的全部成分的全部抗 免疫原中的一种成分的一 原决定簇 个抗原决定簇 特异性亲和力的重复性 不同批号间有变化 无变化 与其它抗原的交叉反应 与带有共同抗原决定簇的抗 一般无。 结合到共同决定簇 原有部分交叉 则是完全的 免疫球蛋白的种类与亚类 完全是混合的 只是一种或几种 免疫球蛋