第五单元 基因克隆题源.docVIP

名词解释 限制性核酸内切酶：简称限制酶，是一类能够识别双链DNA分子中某些特定的核苷酸序列，并在该序列切割DNA双链结构的核酸内切酶。 同尾酶：末端是相同的限制性核酸内切酶。 DNA聚合酶：是指那些以DNA或RNA为模板催化合成互补新链的酶，这类没大都需要一个引物来引发DNA的聚合作用，参与DNA复制和DNA损伤的修复。 DNA连接酶：简称连接酶，是指在双链DNA分子单链间断处或是两条DNA片段接头位置上相邻的5’—P和3’—OH之间催化形成一个磷酸二酯键，使两个DNA片段或DNA单链间断连接起来的一种酶。 基因克隆技术：是包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组的DNA，然后送入受体生物中去表达。从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。 载体： 要把一个有用的基因通过基因工程手段送进生物细胞中，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具叫载体。 质粒：是细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，是一类亚细胞有机体，结构简单，没有蛋白质外壳，没有细胞外的生命周期，可以在宿主细胞内独立增殖，可以随宿主细胞的分裂而被遗传下去。 转化：是感受态的大肠杆菌细胞捕获和克隆或表达质粒DNA分子的基因转化方法。 转染：是感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的基因转化方法。 10、感受态细胞：为了有效地使细菌吸收外源 DNA分子，通常要对它们进行一些物理或化学处理，处理后的细胞吸收外源DNA分子的能力大大提高，这种细胞被称为感受态细胞。 11、蓝白筛选：当带有氨苄青霉素的培养基中加有X-gal及一种?-半乳糖苷酶的诱导物IPT是，那些能合成完整?-半乳糖苷酶的未重组子就会因它能酶解X-gal而变成深蓝色，而重组子因lacz’基因被破坏不能合成完整的?-半乳糖苷酶而呈白色。 12、融合蛋白：由一条短的多肽和真核蛋白质结合在一起的蛋白。 13、开放阅读框：在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码子为止的一个连续编码序列。 14、星活性：是指在非最适的反应条件下，有些酶的识别特异性会降低，表现出松弛的专一性。 15、基因组文库：将某种生物的全部遗传组成（DNA）切成适当长度的片段，连接在载体上，转化到宿主细胞中而构建的基因文库。 16、cDNA文库：通过一系列的酶催作用，使总Poly（A）mRNA转变成双链cDNA群体，并插入到适当的载体分子上，然后再转化给大肠杆菌寄主菌株的细胞内。如此便构成了包含着所有基因编码序列的cDNA基因文库。 17、目的基因表达系统：泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的宿主细胞，并能在其中有效表达，产生目的基因产物（目的蛋白） 18、间断：在DNA的一条链上某一位置两个相邻的核苷酸之间的磷酸二酯键发生断裂。 19、粘性末端：大多数限制性核酸内切酶在DNA的两条链错开2~4个核苷酸切断，这样产生的DNA末端会带有5’突出或是3’突出的DNA单链，这种末端称为粘性末端。 20、质粒的不亲和性：是指没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象。其基础是由于它们在复制功能之间的相互干扰造成的。 填空题 1.（1973年）被评定为基因工程诞生之年。而Cohen创立了基因工程的基本模型，是基因工程的创始人。（1996年）世界上第一只基于核移植技术的克隆动物“Dolly”诞生。 2. DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是用（枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶）切割DNA聚合酶Ⅰ得到的分子质量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：①（5’→3’合成酶的活性）；②（3’→5’外切核酸酶）的活性。 3. 切口移位法标记DNA的基本原理在于利用（DNA聚合酶Ⅰ）的（5’→3’外切核酸酶）和（5’→3’合成酶）的作用。 4. 反转录酶除了催化DNA合成外，还具有（核酸水解酶H）的作用，可以将DNA-RNA杂种双链中的（RNA）水解掉。 5. 就克隆一个基因来说，最简单的质粒载体也必须包括三分部分：（复制区）、（选择标记）、（克隆位点）。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子质量。 6. pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于（pMB1），它的四环素抗性基因来自于（pSC101），它的氨苄青霉素抗性基因来自于（pSF2124或R质粒）。 7. pBR322的最大容载能力是（6kb），λDNA的最大容载能力是（23kb）。 8. 既能在E.coli又能在S.cervisiae中自我复制的载体DNA称为（穿梭载体）。 9.Ⅰ型限制性核酸内切酶属于（复合核酸酶），既具有（内切酶的活性）又具有（甲基化酶）的活性。 10. 正丁醇抽提法是用于去掉插入DNA中的（EB）。 11. pUC质粒载体的复制起点来自（pBR322），还含有大肠杆菌（β