第11讲 转录.ppt

帽子结构 mRNA的剪切（cleavage) 是mRNA前体剪去某些内含子，在上游的外显子3`-端直接加polyA。剪切是某些mRNA的加工方式。 剪切和剪接两种加工方式有时共用于某些mRNA的转录后加工。 （参见书图11-23/24） 肠粘膜细胞有特异的胞嘧啶核苷脱氨酶，可与apoB基因转录的mRNA上第2153密码子CAA结合,将其C转变为U,使CAA变为终止密码子UAA,终止翻译。 剪接体： mRNA的剪接在剪接体上进行。剪接体由5种snRNP（U1～U6 snRNP）组成。 剪接体形成：大多数内含子结构为5`-GU……AG-3`。首先是U1、U2 snRNP的U1 、U2 与内含子边界序列结合， U4 、U5 、U6 snRNP加入，形成剪接体。 snRNP的U1 、U2 snRNA与内含子结合 UACUACA - AG UG U4 U5 U6 E1 E2 U1 U2 剪接体的形成 剪接体催化中心：剪接体释放U1 、U4 、U5 后，U2 和U6 形成剪接体催化中心。此时，内含子弯曲成套索状，上下游外显子靠近。 UACUACA - AG UG U6 E1 E2 U1、U4、U5 UACUACA - AG UG U4 U5 U6 E1 E2 U1 U2 催化中心的形成 U2 剪接过程：在剪接体催化中心，发生两次转酯反应。 第一次转酯反应：含鸟苷酸pG、ppG或pppG的辅酶，以3`-OH对E1/I之间的磷酸二酯键作亲电子攻击，使共价键断开。 第二次转酯反应： 由E1的3`-OH对I/E2之间的磷酸二酯键作亲电子攻击，使其断开，2个外显子相连而内含子被切除。 pG-OH (ppG-OH, pppG-OH) GU-OH AGpU pGpA 第一次转酯反应 第二次转酯反应 GUpA AGpU 外显子1 内含子 外显子2 AG-OH GUpU pGpA 4、mRNA的剪切（cleavage) （四） mRNA的编辑(mRNA editing) 人类apo B基因 mRNA（14500个核苷酸） 肝脏apo B100 （分子量为513 kD） 肠道apo B48 （分子量为250kD） mRNA编辑 茎环结构使转录终止的机理 5′pppG 5? 3? 3?5? RNA-pol 一、真核生物的RNA聚合酶 RNA-pol Ⅰ RNA-polⅡ RNA-pol Ⅲ RNA 聚合酶 真核生物RNA聚合酶比原核生物复杂，其都有两个不同的大亚基和十几个小亚基。 第三节 真核生物RNA的生物合成 真核生物RNA聚合酶特性与催化产物 中度敏感 极敏感 耐受 鹅膏蕈碱反应 同上 mRNA 18S-rRNA 28S-rRNA 5.8S-rRNA 加工产物 5S-rRNA, tRNA, snRNA hnRNA 45S-rRNA 转录产物 Ⅲ Ⅱ Ⅰ 种类 hnRNA(杂化核RNA，hetero-nuclear RNA)：经加工生成mRNA snRNA(核内小RNA, small nuclear RNA) ：有多种，由100-300核苷酸组成，参与RNA的剪接过程。 启动子 增强子 沉默子 TATA盒（Hogness盒） CAAT盒 GC盒 顺式作用元件 二、真核生物转录起始 真核生物转录模式：顺式作用元件+结构基因 转录起始点 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子或沉默子 真核生物转录模式 AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 （一）顺式作用元件（Cis-acting element） 概念：是指可影响自身基因表达活性的DNA序列。可位于结构基因两侧，多见于上游，包括启动子、增强子和沉默子。 5’ 3’ 调控序列 TATA盒 Inr YYAN YY T A -30 +1 TATAAA 启动子：保守序列常见有: TATA盒（Hogness盒，TATAAAA） CAAT盒 (GCCAAT) GC盒(GGGCGG) 某些启动子具有位于转录起始点附近 的保守序列，称为起始子(initiator, Inr)。 启动子保守序列可结合不同的转录因子，参与转录起始。 TATA盒常是启动子的核心序列，可结合TBP(TATA bonding protein，TATA结合蛋白)。 转录起始时，多种转录因子结合于启动子，真核RNA-pol通过转录因子间接与启动子结合，与原核RNA-pol不同。 增强子(enhancer)：是远离转录起始点，具有增强启动子转录活性的DNA序列。其可与增强子结合蛋白EBP(enhance binding protein)结合，促进转录。 沉默子(silencer)：是远离转录起始点，可抑制基因转录的DNA序列。其可与转