颞叶癫痫大鼠海马区NCX3mRNA与蛋白的表达变化研究.pdfVIP

颞叶癫痫大鼠海马区NCX3mRNA 和蛋白的 表达变化研究1 江利敏，肖波，林祐成，李蜀渝，周艳辉，柳茵 中南大学湘雅医院神经内科（410008 ） E-mail ：yanxia@ 摘 要：目的：动态观察钠-钙交换体（NCX3 ）mRNA 和蛋白在氯化锂－匹罗卡品致痫大 鼠模型海马CA1 、CA3 及齿状回区的表达变化，探讨其在癫痫的发生发展中的作用。方法： 用氯化锂（LiCl ）和匹罗卡品（PILO ）制备癫痫动物模型；应用原位杂交和免疫组化染色 技术检测各时间断点 NCX3mRNA 和蛋白的表达。结果：急性期（6 ～24h ）海马各区 NCX3mRNA 表达均随时间的延长逐渐减少；进入静止期各区表达趋向回升，慢性反复自 发发作期（30d ，60d ）各区表达又出现不同程度的二次下调。除致痫后6h 大鼠海马各区的 NCX3 蛋白表达无明显变化之外，NCX3 蛋白变化趋势与NCX3mRNA 基本一致。结论： NCX3 表达下调可能通过增加神经元钙超载，改变海马神经元的兴奋性，促使癫痫发生。 关键词：颞叶癫痫，海马，钠－钙交换体（NCX3 ） 目前多数研究认为钙稳态失调与癫痫的发生密切相关。生理状态下细胞钙稳态的维持 是钙移入机制与钙移出机制动态平衡的结果。Na+-Ca2+交换体和钙-ATP酶是电活动后将胞 内增加的Ca2+ 移出细胞的重要转运体。研究发现，钙-ATP酶虽与Ca2+ 的亲和能力较高 （K=100nM ），但其转运能力却较低（约150/s），而Na+-Ca2+交换体与Ca2+ 的亲和能力较 低（K=500nM ），但它却有较高的转运能力（1000～5000/s)[1] 。有资料显示电活动后胞内 2+ + 2+ [2] + 2+ 迅速增加的Ca 约 2/3 是由Na -Ca 交换体转运至胞外的 。Na -Ca 交换体更适宜于胞内 2+ + 2+ 高Ca 水平的快速转运，因此探讨Na -Ca 交换体在癫痫的发生发展中的作用对于揭示癫 痫的发病机制将具有非常重要的意义。自从1988 年Philipson首先从狗的心脏中克隆出心脏 型NCX (NCX1)后，随后NCX及其数个剪接异构体如NCX2 、NCX3 等在别的种类及组织中 也相继被克隆。近年Canitano等[3]发现NCX3 广泛表达于海马兴奋性输入通路上，提示NCX3 可能与癫痫发病相关。本实验利用氯化锂－匹罗卡品致痫大鼠模型，通过检测海马齿状回 （DG ）和CA1、CA3 区NCX3 mRNA和蛋白急性期、静止期和慢性期表达的动态变化，首 次从钙移出机制方面探讨癫痫的发病机制，以期为癫痫的临床药物治疗提供新的思路。 1. 材料与方法 实验动物与分组：选6 －8 周龄健康雄性Sprague-Dawley 大鼠70 只，体重220 －250g ， 由中南大学动物实验中心提供，分为正常对照组（6 只）与实验组（64 只）。实验组动物 随机分为8 个亚组（各8 只），分别于癫痫发作后6h、12h、24h 、3d、7d、15d、30d、60d 时间断点检测指标，其中24h 内代表急性期，3～15d 属于静止期，30d 及60d 归于慢性期。 动物标本制备：实验组动物腹腔注射 LiCl （美国SIGMA 公司）3mEq/kg( 约 125mg/kg)，18 小时后腹腔注射PILO （美国Boehringer Mannheim 公司）10mg/kg/次，每 1本课题得到教育部高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划（2001-182 ）和高等学校博士学科点专项基 金（20030533042 ）的资助。 -1- 30m