培养基{含测试试剂}质量控制规程.docVIP

培养基（含测试试剂）质量控制规程 一、培养基制备要求 培养基的一般性状：液体培养基应透明、清亮，颜色符合要求。固体培养基应表面湿润但无水汽、平整光滑，厚薄均匀，一般厚度在3mm（M-H平板厚度不得4mm）。斜面的长度不得超过试管长度的2/3)。PH值应在规定值±0.2的范围内。 培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下： 1. 根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。 2. PH测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。 3. 培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净凉干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。 4. 盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。 5. 培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。 6. 每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。 7. 目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。 8. 每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。 二、培养基的质量控制 培养基的质量控制主要包括三方面的内容：pH测试、无菌试验以及已知菌生长试验。如果使用商品化脱水培养基，严格按照说明操作，一般不必再进行pH测试。如果使用基础物质进行培养基制备，在培养基冷却后须进行pH测试。如果pH测得值与预期值相差0.2单位，则需要酸碱调节；无菌试验一般为随机抽样3-5％，在35℃条件下培养48h。如果抽样中每个培养基上出现2个以上菌落，证明本批培养基已被污染；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。有关常用培养基的已知菌生长试验见表1。 表1 常用培养基已知菌生长试验 培养基 孵育条件 已知菌株(ATCC) 预期结果 血琼脂 需氧或 化脓性链球菌19615 生长并产生a-溶血 C02，24h 肺炎链球菌6305 生长并产生β-溶血 大肠埃希菌25922 生长 巧克力琼脂 CO2，24-48h 淋病奈瑟菌43069 生长 流感嗜血杆菌10211 生长 麦康凯琼脂 需氧，24h 大肠埃希菌25922 生长，粉红色菌落 (不含结晶紫) 奇异变形杆菌12453 生长，无色菌落，迁徙现象受抑制 　　　　　　　 鼠伤寒沙门菌14028 生长，无色菌落 粪肠球菌29212 生长 金黄色葡萄球菌25923 生长，粉红色菌落 大肠埃希菌25922 生长，粉红色菌落 麦康凯琼脂 需氧，24h 奇异变形杆菌12453 生长，无色菌落，迁徙现象受抑制 (含结晶紫) 　　　 　　　　　　　　　　　　鼠伤寒沙门菌14028 生长，无色