实验室实验操作指南.doc.pdfVIP

实验操作指南 1.产甘油假丝酵母Candidaglycerinogenes 1.1酵母总DNA 提取 1)培养酵母菌体：使用接种环取C.glycerinogenes单菌落，YEPD液体培养15 h。将酵母种子液转接置至10mL的YEPD 培养基中，接种量为5%，培养18~19h 至对数生长期；取1.5mL上述对数期酵母菌体于无菌离心管中，离心收集菌体 -1 (8000r·min ，3min)，弃上清。 -1 2)加入100μL STESbuffer，震荡摇匀后得细胞悬浮液，离心(8000r·min ，3 min)弃清液；加入STESbuffer 30 μL，震荡摇匀，加玻璃珠至略低于液面，剧烈 震荡3min。 3)加入无菌双蒸水200 μL，然后加200 μL苯酚、氯仿、异戊醇混合液(体积比 -1 为25：2 ：1)，剧烈震荡2min，1200r·min 离心5min。 4)取200 μL上清液，再次加