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徐 州 工 程 学 院 教 案 2013 年至 2014 年 第 1 学期 第 周 星期 课题名称（含教材章节）： 《酶工程实验》 实验一 产纤维素酶菌株筛选和产酶条件优化分析 教学目的和要求： 1、熟悉功能性菌株筛选方法 2、掌握纤维素降解菌株的筛选方法 3、掌握菌株产酶条件优化方法 教学重点： 酶工程研究开发的策略 教学难点： 产酶条件优化方法 教 学 内 容 （ 要 点 ） 1、产纤维素酶菌株的筛选分析 2、菌株产酶条件优化 徐 州 工 程 学 院 教 案 纸 一、实验目的实验原理 (1)酶的粗提； (2)酶的精制。 (九) 微生物产酶菌种的保藏 (1)斜面； (2)沙土管； (3)冷冻。 普通冷冻保藏技术(-20℃) 超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃) 液氮冷冻保藏技术 (二)、纤维素酶研究情况 2.1 纤维素酶简介 2.1.1 纤维素 纤维素占植物干重的35%~50%，是地球上分布最广的碳水化合物。它无色、无味，呈白色丝状，不溶于水及一般的有机溶剂。纤维素分子是由葡萄糖苷通过β-1,4糖苷键连接起来的链状高分子，分子量50000~2500000，相当于300~15000个葡萄糖基，不形成螺旋构象，没有分支结构，易形成晶体。 2.1.2 纤维素酶 纤维素酶是能将纤维素水解成还原糖的一类酶系的总称。目前普遍认为要完全降解纤维素，至少需要3种功能不同的酶协同作用。它们是 EG(内切葡聚糖酶)、CBH(外切葡聚糖酶)和 CB(β-葡萄糖苷酶)。 2.2 纤维素酶的应用 2.2.1 在能源方面的应用 乙醇是一种可以通过糖发酵获得的可再生能源。在美国，乙醇已经被广泛地作为石油燃料的替代品。从上世纪80年代开始，用玉米生产的燃料乙醇就被作为酒精-汽油混合燃料或者氧化燃料来使用。这些混合燃料中乙醇的体积比例高达10%。使用乙醇混合燃料可以降低石油燃料的使用量，从而在一定程度上减少了温室气体的排放。然而使用玉米生产的乙醇燃料比石油燃料成本高，因为作为一种作物，玉米需要一定的培植时间和成本；同时，玉米本身是一种食物和饲料，大量地用于生产乙醇是不可行的，毕竟耕地资源有限。废弃纤维素原料比如农林废弃物、草、锯末和木片等是生产乙醇的潜在的而充足的可再生性资源。利用纤维素酶有效地将这些纤维素物质转化成葡萄糖等单糖，然后通过微生物发酵的方法将葡萄糖转化成乙醇，将为乙醇混合燃料的生产与应用打开一片新天地。 开发利用这一可再生资源的关键是纤维素物质的预处理以和如何使纤维素酶在水解过程中酶活性最大地发挥。预处理可以去除木质素和半纤维素，在一定程度上降低纤维素的结晶度并且增加纤维素物质的可接触面积。至于纤维素酶，为了满足竞争的需要，生产每加仑乙醇的纤维素酶的成本不能过高。这样就要求尽量降低纤维素酶系统的复杂度，只保留少量几种必须组分；更重要的是生产出能够更有效地水解预处理过的纤维素物质的重组型纤维素酶。 2.2.2 在其他方面的应用 纤维素酶已被广泛的应用于食品、酿造、农业、纺织、洗衣等多个领域中。 食品工业中利用纤维素酶处理植物性原料，可使植物细胞壁软化、崩溃，从而改变细胞壁的通