实验报告十单光子分析仪与植物细胞活性氧检测.docxVIP

装 订 线 课程名称： 生物仪器分析 指导老师： 成绩：_______________________实验名称：单光子分析仪与植物细胞活性氧检测 实验类型：探究 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤（必填）五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析七、讨论、心得实验目的和要求1、了解并掌握单光子分析仪的原理。2、掌握用单光子分析仪测定植物活性氧的方法。实验内容和原理内容：1、用单光子分析仪测定植物活性氧。2、同时制作对照组。原理： 1、植物产生活性氧原理 植物与病原物互作后的信号传递激活了包括活性氧 (AOS：active oxide species)的生成和其它各类防卫反应。活性氧进发(oxidative burst)被认为是过敏反应(HR：hypersensitive response)的特征性反应，也是植物对病原物应答的最早期反应之一。 AOS主要由病原菌诱导产生，其中非亲和病菌诱导AOS进发强烈且持续时间长。植物在处于一些逆境(stress)条件下，(例如：低温、紫外光)，也能产生AOS。 植物体内主要的AOS 是：超氧阴离子(?O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(?OH-)。它们之间可以相互转变。其中?OH-极为活泼，能与有机化合物作用产生自由基链反应，氧化细胞质膜成分，使酶失活、核酸降解，从而导致细胞损坏，组织坏死，产生过敏反应。植物具有完整的体系来调节活性氧的生成和积累，确保有效信号传导，这样既可使植物能抑制病菌 的感染和再度侵入，又能使自身少受氧化胁迫。2、化学发光法检测活性氧H202可以氧化化学发光试剂如发光氨(鲁米诺)并释放出光子(photon)，根据发光强弱得以定量测定。该方法是测定光子数而非反应的化学产物，在植物活性氧检测中应用也相当广泛。单光子分析仪原理单光子分析仪组成：图像增强器、锥形光导纤维束、读出相机图像增强器组成：输入窗口、光电阴极、MCP、荧光屏工作原理：光电阴极将输入的光子转换为光电子，通过MCP将光电子增强，荧光屏将增强的光电子重新转换为光子，做到将微弱的光增强的原理。单光子分析仪通过每一小段时间拍摄一张照片，记录检测过程中光线的变化，电脑显示器上的光照强度是多张照片叠加的结果。主要仪器设备 单光子分析仪操作方法和实验步骤 （1）植物叶的预处理，用打孔器去一片植物叶，加入50μl水放置一夜。 （2）开机预热、清洗仪器、设定参数第一列加入50μl水和鲁米诺混合液，作为空白对照。 第二列加入50μl 25nM鞭毛蛋白、水和鲁米诺混合液。 三四列不加任何东西。（4）测定发光信号。 （5）观察测试结果。 （6）使用电脑软件进行分析。实验数据记录和处理 1、检测的过程中光变化图1图2图3图4图5图6图5 光照随时间的变化2、使用软件进行分析图6 选择3个点各自做一条光照随时间的变化图7 做前4个点光照随时间变化的平均值图8 做全部8个点光照随时间变化的平均值表1 Col-H2Otime/sectime/min1号2号3号4号5号6号7号8号平均值00183021862486235325512958193514042212.875601369727528905933988536585696.37512024022774001021567939702686624.25180344938456280077613751017790769.1252404636366407104912751328971979876.37530058496577191091127516399937961002.375360679858176013831466146912336501042.54207755896114213691416176413778911201.254808702648106613911293156411657991078.55409475107289515941540205014678631244.560010700710121213311329177914898941180.5660116019741141154314532099139412321304.6257201277376269715841660168213488491169.3757801374593585010171201186315268301120.8758401454874686214421338196713707721130.625900155846837331006175415039009961019.875960165167916119667791644750552826.1251020173585