动物细胞培养和核移植技术zb.pptVIP

（MⅡ卵母细胞） 减数第二次分裂中期 去核的卵母细胞 供体细胞注入去核卵母细胞 激活受体细胞，完成分裂、发育 胚胎移植 代孕牛子宫 克隆牛 3、核移植过程： 胚胎移植 胚胎发育 供体体细胞 细胞培养 体细胞群 细胞融合 细胞 胚胎 代孕母体 生出克隆个体 卵巢卵母细胞(减Ⅱ) 去核 无核卵母细胞 体细胞核移植技术过程 卵原细胞 卵细胞 卵原细胞 卵细胞和极体 次级卵母细胞 第一极体 MⅡ期： 减数第二次分裂中期 卵母细胞作受体细胞的原因： 体积大，易操作； 含有激发细胞核全能性的物质。 去核的方法有哪些？ 目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。 还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核目的。 细胞核核移植 供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵母细胞 （MⅡ期：供质） 去核 无核卵母细胞 注 入 细胞融合 重组细胞 重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 与供体奶牛遗传基础相同的犊牛 2.体细胞核移植过程 分娩 妊娠 激活 四、体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2、保护濒危物种，增加存活数量 3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植 五、体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植后动物幼体产出概率＜10％； 克隆动物存在着健康问题； 克隆动物的食品安全性问题存在争议。 * 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植 * 胃蛋白酶最适PH约为2.在PH为7的环境下已经失去活性 知识回顾 植物细胞工程 植物细胞工程技术 植物细胞工程应用 植 物 组 织 培 养 植 物 体 细 胞 杂 交 植 物 繁 殖 的 新 途 径 作 物 新 品 种 的 培 育 细 胞 产 物 的 工 厂 化 生 产 与生活的联系： 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 最基础的是 ——动物细胞培养技术 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 （一）概念： 一、动物细胞培养 原理：细胞增殖 取幼龄动物的器官或组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 (二)动物细胞培养的过程: 4、动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 无限传代 胰蛋白酶 单个细胞 细胞悬浮液 加培养液 细胞株 遗传物质未改变 细胞系 遗传物质已改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型； 10代~50代左右时，细胞增殖缓慢，部分细胞核型可能改变。 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，这些细胞增殖 能力强，有丝分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 2、分散成单个细胞 在进行动物细胞培养时，用 分散细胞，说明细胞间的物质主要是 。 (二)动物细胞培养的过程： 蛋白质 胰蛋白酶 分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代谢废物，利于继续培养。 思考：1、为什么要将组织块分散成单个细胞培养？ 思考2、胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 控制好消化时间，太长会消化细胞膜上的蛋白质； 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近。 思考3、动物细胞培养能否最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。 3、动物细胞生长特性： 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。 （1）细胞贴壁： 将细胞悬液置于适宜环境中培养，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 （2）细胞的接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 原代培养(分装之前，10代以内） 通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养(分装之后，10代及以后） 将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 相关概念： 具有贴壁生长和