RNA的制和备及纯度的鉴定ppt.pptVIP

;（一） 操 作 方 法;背景知识;mRNA的选择性拼接 合成类RNA ;;实验目的;实验原理;?　RNA制品继续用氯仿－异戊醇处理，可以进一步除去其中含有的少量蛋白质。最后用乙醇使RNA自水溶液中沉淀下来。 ? 实验所得制品的核酸含量可用地衣酚显色法测定RNA含量?。RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20～250 g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。 ;实验器材与试剂;试剂：;实验步骤;RNA提取流程;二.实验过程 1.取2g动物肝脏组织，剪成小块，在乳钵种研碎，加20mLSDS-缓冲盐溶液（见试剂1.）使成均浆，倒入磨口具塞锥形瓶内，再加同样体积的含水酚溶液，室温下剧烈振荡10分钟。 2.置冰浴中分层，在0-4℃下，以4000rpmn离心15分钟。吸出上清液，加等体积氯仿－异戊醇，室温下剧烈振荡10分钟，以4000rpm离心5分钟，或在室温下放置10分钟使分层。吸出上清液（若有必要，该操作可反复多次），加2倍体积2% 乙酸钾的乙醇溶液，在冰浴中放置1小时使RNA沉淀，此沉淀液可在冰箱内较长期存放。 ;3.若要得到干燥制品，可将沉淀液以4000rpm离心10分钟，倾去上清液。沉淀用少许75%乙醇、95%乙醇、