显微镜使用技术.PDF

环境生物学实验指导 中国石油大学（北京） 王新伟 编 2009.3 目 录 第一部分 微生物实验基本技术 1 实验1 普通光学显微镜的使用 1 实验2 培养基种类与配制程序 8 实验3 培养基及器皿的消毒和灭菌 15 实验4 无菌操作、接种技术和培养方法20 实验5 微生物大小和数量测定27 第二部分 环境中的微生物（空气、水）检测36 实验6 空气中微生物计数36 I. 空气中微生物计数36 II. 实验室环境和人体表面微生物的检查37 实验7 水中细菌总数和大肠菌群的检测40 第三部分 微生物形态和结构观察50 实验8 细菌染色和形态结构观察50 实验9 放线菌形态和结构观察56 实验10 真菌形态和结构观察58 附录 染色液的配制62 第四部分 微生物分离与纯化技术63 实验11 土壤中微生物的分离、纯化63 本学期实验内容70 实验一、培养基的配制和灭菌（验证型）70 实验二 环境中的微生物（空气、水中细菌总数）检测 （研究型）72 实验三、四 污染环境优势菌的筛选I 、II （设计型）74 实验五、污染环境优势菌的形态观察（研究型）75 《环境生物学实验》评分标准76 第一部分 微生物实验基本技术 17 世纪荷兰人列文虎克制造了第一台显微镜，首次把微生物世界展现在人类 面前，至今已经历300 余年。显微镜的问世对微生物学的奠基和发展起到了不可估 量的作用。在长期的实践中，显微镜不断推陈出新，已成为微生物研究的重要工具。 在微生物实验中，常用的显微镜主要有普通光学显微镜、相差显微镜和荧光显 微镜等。下面介绍普通光学显微镜的使用技术。 实验1 普通光学显微镜的使用 普通光学显微镜简称光学显微镜（light microscope ），以平均波长为550nm 的 可见光作为光源，能分辨的两点距离约为0.22μm。多数细菌的个体大于0.25μm， 因此可在光学显微镜下观察。由于许多细菌的大小与光学显微镜的分辨率处于同个 数量级，为了看清细菌的形态与结构，经常使用油镜来提高显微镜的分辨率。在光 学显微镜的使用中，油镜的使用是一项十分重要的操作技术。 一、目的要求 1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。 2 、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察细菌的几种基本形态。 4 、在高倍镜下观察细菌运动。 二、基本原理 （一）普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统 机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2 ）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。 （3 ）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜 筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是 160mm。 有些显微镜的镜筒长度可以调节。 （4 ）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5 个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转 动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推 动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。 1 （5 ）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装 有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移 动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。 （6 ）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜 与标本间的距离，使物像更清晰。粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调 螺旋转