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医学大大 沉 淀 反 应 沉淀反应 Ag + Ab IC 可溶性抗原 （如血清、毒素等） 分类 实验目的： 用已知抗体检测未知IgG抗原。 一、双向免疫琼脂扩散 实验原理： 可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内 进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线（阳性反应）。 二、对流免疫电泳 【实验原理】 蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。 抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。 这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。 电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷。 【实验材料】 1．电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2．抗体：诊断血清（IgG抗体）。 3．抗原：阳性血清、待检血清。 4．1％盐水琼脂。 5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。 【实验方法】 1．制板 2．打孔：双排孔 3．加样 4．电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压6～10 V/cm板长，电泳约30～60 min。 5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。 【实验结果】 将玻片对着强光源观察，生理盐水孔与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔之间有沉淀线出现，则表示IgG 阳性，否则为阴性。 * 温度、pH 浓度、电解质 沉 淀 反 应 环状沉淀反应 絮状反应 琼脂扩散试验 双向扩散 单向扩散 ＋ 电 泳 技 术 火箭免疫电泳 对流免疫电泳 一、双向免疫琼脂扩散 材料： 1％盐水琼脂， 诊断血清【IgGAb】, 阳性血清（IgG Ag）， 生理盐水， 待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。 一、双向免疫琼脂扩散 实验方法： 1、融化1％盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶板：4 ~ 5ml/片 3、打孔：梅花孔 (如图) 4、加样（每孔约10μl）； 5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 实验结果分析 1 1 Anti-1 一、双向免疫琼脂扩散 结果判读： 阳性血清与诊断血清间形成沉淀线 生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线 如果待检血清与诊断血清间形成沉淀线，而且与阳性对照的沉淀线融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。 诊 乙 阴 乙 阳 甲 甲 对流免疫电泳实验原理 电泳力 电渗力 甲 诊 正极 NS 诊 乙 诊 甲 诊 阳 诊 乙 诊 负极 Ag Ab Ag Ab 加样 甲 诊 NS 诊 乙 诊 甲 诊 阳 诊 乙 诊 * *