浙江大学生与物化学实验甲SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量.pptVIP

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 1.1、原理 电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带静电荷的多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。蛋白质分子在外加电场下的泳动行为可用下列函数式表示： SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基磺酸钠（SDS），则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量的大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。 SDS是一种阴离子去污剂，它在水溶液中以单体和分子团的混合形式存在。 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 这种阴离子去污剂能破坏蛋白质分子之间以及与其它物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的空间构象，特别是在强还原剂，如巯基乙醇存在下，由于蛋白质分子内的二硫键被还原，从而保证了蛋白质分子与SDS能充分结合，形成带负电荷的蛋白质- SDS复合物。 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 这种复合物由于结合了大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。 SDS与蛋白质结合后，还会引起蛋白质分子发生构象的改变，使蛋白质复合物在水溶液中的形状近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质-SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.