液相色谱法与.pptVIP

第一节 吸附色谱法 一. 基本原理 1.定义 各组分基于吸附现象而获得分离的液—固 色谱分析方法，按操作方式又可分为吸附柱色 谱和薄层色谱。 2.吸附色谱法的依据 吸附过程的两个规律： 1）吸附过程是可逆的，存在着 吸附 解附的动态平衡 2）吸附剂对不同物质的吸附行为有差异 ----选择性吸附 3.吸附机理 流动相通过固定相时，吸附剂表面的活 性中心吸附流动相分子，当组分分子进入柱 子时，会赶走流动相分子而占据吸附剂的活 性中心位，即组分被吸附；反之，溶剂分子 也可把溶质分子赶走，即解吸。 4.吸附等温线 指在一定温度下，某一组分在固定相和 流动相之间达到平衡时，组分在固定相中的 浓度Cs对组分在流动相中的浓度Cm作图得到 的曲线，用函数描述为Cs=f（Cm），它描述 了组分在两相中浓度之间的关系。 二、吸附剂 1.对吸附剂的要求 1）颗粒要有一定的细度且粒度要均匀 2）具有较大的吸附表面积和一定的吸附 能力 3）与洗脱剂、样品不起化学反应，且不 溶于洗脱剂中 2.常用吸附剂 吸附剂有无机和有机两大类。 有机类包括活性炭、淀粉、蔗糖等； 无机类包括氧化铝、硅胶、硫酸钙、 滑石粉、硅藻土等。其中以硅胶和氧化铝 较为常用。 1） 氧化铝 优点：分离能力强、活性可控 分类：酸性、中性、碱性，以中性氧化 铝使用较多。用来分离生物碱、挥发油、萜 类、甾体、蒽醌以及在酸碱中不稳定的苷类、 醌、内酯等化合物。 活化温度：200～400℃ 2）硅 胶 优点：适用于各类样品的分离 吸附能力：取决于骨架表面的硅醇基 吸附机理：硅胶表面羟基作为质子给予 体，通过氢键形式将溶质吸附在硅胶表面。 由于硅胶具有弱酸性，所以选择性地保留 胺类和其它碱性化合物。 活化温度：105～110℃ 3）吸附剂的活性 吸附剂的活性与含水量有一定的关系。 含水量愈高，其吸附活性愈低，活性级数 愈大，吸附力就愈弱。反之，含水量愈低，其 活性愈高，活性级数愈小，吸附力就愈强。 所以吸附剂在使用前必须先经过活化处理。 在一定温度下，加热除去水分以增强活性的过程称之活化。 三、流动相及色谱条件的选择 在液固色谱中，除了正确选择吸附剂外， 还可以通过流动相的选择来改变K值，或改变 一对化合物的K值比，从而使它们的K值有最大 的差别而达到分离。 流动相在色谱分析中除了起着推动溶质通 过色谱柱的作用，还影响着溶质的分配系数， 所以在色谱分析中流动相的选择也很重要。 极性较大的化合物可以比较强的从 溶液中被吸附剂吸附，需要极性较大的 洗脱剂才能洗脱下来。 四、操作方法——薄层色谱 1.基本概念 1）薄层色谱法 将吸附剂（或载体）均匀地铺在玻璃板 或塑料板、铝箔、聚酯薄膜上，形成薄层， 把要分离的样品点加在薄层上，然后用合适 的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量的目的。 2）比移值Rf 在薄层色谱法 中，常用比移值Rf 来表示各组分在色 谱中的保留行为。 在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1 之间。当Rf值为0时，表示化合物在薄层上不 随溶剂的扩散而移动，仍在原点位置；Rf为1 时，表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶 剂同步移动。 一般要求Rf值在0.05～0.85之间，最佳范 围是0.3～0.5。 3）薄层色谱法的特点 展开时间短，一般只需十几到几十分 钟； 分离能力强，斑点集中； 灵敏度高，通常用量为几至几十微克； 显色方便； 仪器简单，操作方便。 2.操作技术 薄层色谱法的操作步骤： 选择 制板 点样 展开 定位显色 定性定量 选 择 (1)选板——玻璃板 表面光滑、平整清洁 (2)固定相（吸附剂） 粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等 (3)流动相 (4)显色剂 制 板 薄层板的制备，就是将吸附剂均匀地涂 铺在玻璃板上，使成薄层，称之为制板。 制板的步骤： (1)吸附剂的涂布 (2)板的活化 (1) 吸附剂的涂布 常用薄板可分为加粘合剂的硬板和不加粘 合剂的软板两种。一般氧化铝采用软板多，而 硅胶常采用硬板。 硬板的涂铺方法有以下几种： 倾注法 、平铺法、涂铺器 、喷雾法 板的活化 铺成的