电镜超薄切与片.pptVIP

透射电子显微镜生物制品制备技术 组织学与胚胎学教研室：苏衍萍 冷冻蚀刻法 冷冻割断术 细胞化学法 免疫组织化学技术 免疫电镜法 电镜放射自显影术 放射自显影技术 扫描电镜技术 现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类： 一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法； 另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫电镜法、放射自显影技术、X线微区分析技术等。 1、????? 超薄切片样品的制备 （1）?? 取材 基本要求是在活体情况下进行 取材的原则(快、准、轻、小、冷的原则） 1）? 快速：1分钟之内投入固定液。 2）?? 块小：0.5-1mm3或截面1mm2的长条。 3）?? 部位准 4）? 损伤小：器械应锐利，避免牵拉、挤压，防止组织受机械损伤。 5）??? 低温：0-4oC 取材的方法 1）动物材料： 对神经组织等要进行原位固定或灌注固定，待组织适当硬化后再取材。 2）培养细胞： 生长在瓶中的细胞到足够的量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛固定液，在冰浴下3-5分钟、弯头吸管吹打或用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种混合液倒入离心管中，2000rpm低速离心15-20分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次固定液，将其移入修块台，修快成标准块4oC固定、待用。